হিমায়িত কোষ চালান থেকে

হিমায়িত কোষগুলি শুকনো বরফের উপর 1 মিলি অ্যালিকোটে প্রাপ্ত হবে। কোষ সংস্কৃতির জন্য গল না হওয়া পর্যন্ত কোষগুলিকে হিমায়িত রাখুন বা তরল নাইট্রোজেন সঞ্চয়স্থানে রাখুন যদি এখনই সংস্কৃতি শুরু না হয়। যাইহোক, এটি সুপারিশ করা হয় যে আপনি যদি পরবর্তীতে ব্যবহারের জন্য কোষগুলি সংরক্ষণ করতে যাচ্ছেন, তাজা স্টক বাড়ান এবং একাধিক ampoules হিমায়িত করুন। কোষগুলি 45% RPMI-1640, 50% ভ্রূণ বাছুরের সিরাম এবং 5% DMSO (টিস্যু কালচার গ্রেড) এ ক্রায়োপ্রিজারভ করা হয়।

1. একটি T-25 ফ্লাস্কে 10 মিলি RPMI-1640, 15% ভ্রূণ বাছুরের সিরাম (FCS), ±অ্যান্টিবায়োটিক রাখুন।
2. মিডিয়াকে 30 মিনিটের জন্য 5% CO 2ইন বায়ু সহ একটি 37°C আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে ভারসাম্য বজায় রাখার অনুমতি দিন।
3. হিমায়িত কোষের প্রতিটি অ্যাম্পুল 37 ডিগ্রি সেলসিয়াস ওয়াটার বাথ বা হালকা গরম জলের বীকারে একবারে একটি করে গলিয়ে নিন।
4. একটি জীবাণুমুক্ত আইসোপ্রোপ্যানল প্রিপ প্যাড দিয়ে অ্যাম্পুলের বাইরের অংশটি দ্রুত পরিষ্কার করুন, তারপর আঙুলগুলিকে রক্ষা করতে এবং জৈবিক সুরক্ষা হুডের ভিতরে অ্যাম্পুলে সীল ফাটানোর জন্য অ্যাম্পুলের চারপাশে প্রিপ প্যাডটি মুড়ে দিন।
5. একটি জীবাণুমুক্ত গ্লাস পাস্তুর পাইপেট দিয়ে 1 মিলি হিমায়িত কোষগুলিকে সরিয়ে 10 মিলি মাঝারি দিয়ে একটি T-25 ফ্লাস্কে রাখুন। প্রতিটি সেল লাইন সনাক্ত করতে স্পষ্টভাবে ফ্লাস্ক লেবেল করুন।
6. কোষগুলিকে বাতাসে 5% CO 2 সহ একটি 37°C আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে রাখুন।
7. 24 ঘন্টা পরে ফ্লাস্কের নীচে স্থাপিত লিম্ফোসাইটগুলিকে বিরক্ত না করে উপরে থেকে 5 মিলি মাঝারি সরিয়ে ফেলুন এবং 5 মিলি প্রি-ওয়ার্মড মিডিয়াম দিয়ে প্রতিস্থাপন করুন।
8. প্রতি 3 - 4 দিনে 5 - 6 মিলি তাজা মাধ্যম দিয়ে কোষগুলিকে খাওয়ান এবং প্রয়োজন অনুসারে নতুন সংস্কৃতিতে বিভক্ত করুন।

লাইভ সংস্কৃতির চালান থেকে

1. লাইভ লিম্ফোসাইট কালচারগুলি RPMI-1640, 15% FCS, 1% পেনিসিলিন-স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco) দিয়ে শীর্ষে ভরা T-25 ফ্লাস্কগুলিতে পাওয়া যাবে। ক্যাপগুলি টাইট এবং প্যারাফিল্ম দিয়ে সিল করা হবে।
2. প্যারাফিল্ম সরান।
3. বাতাসে 5% CO2 সহ একটি 37°C আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে সংস্কৃতিগুলি রাখুন এবং কোষগুলিকে স্থির হতে দিন (20 - 30 মিনিট)।
4. একটি জীবাণুমুক্ত পাইপেট ব্যবহার করে 10 - 15 মিলি মাঝারি বাদে সবগুলি সরিয়ে ফেলুন এবং বাতিল করুন৷
5. গ্যাস এক্সচেঞ্জের অনুমতি দেওয়ার জন্য ফ্লাস্কগুলিকে কিছুটা আলগা করে আবার ক্যাপগুলি রাখুন (ক্যাপ থ্রেডগুলিতে মিডিয়া নেই তা নিশ্চিত করতে পরীক্ষা করুন। যদি তাই হয় তবে আপনি একটি নতুন ফ্লাস্কে স্থানান্তর করতে চাইতে পারেন।) 5% CO 2in বায়ু দিয়ে ইনকিউবেটরে কালচারগুলি আবার রাখুন . দু-একদিনের মধ্যে তাদের সেরে উঠতে হবে।
6. সেল এগ্রিগেট পুনরায় স্থগিত করে এবং ভলিউমের 50 -60% অপসারণ করে এবং তাজা মিডিয়া দিয়ে প্রতিস্থাপন করে প্রতি 3 - 4 দিন পর পর কোষগুলিকে তাজা মাধ্যম দিয়ে খাওয়ান৷ ফ্লাস্ক থেকে সরানো কোষ প্রয়োজন অনুসারে নতুন সংস্কৃতি শুরু করতে ব্যবহার করা যেতে পারে।

ওয়েন্ডি নরিস