תְשׁוּבָה: מחקרי PK/PD הצביעו על זמינות ביולוגית של 100% בלב, באבי העורקים ובכליות. הכליה הייתה הרקמה היחידה שבה הייתה הצעה להצטברות, בהתבסס על בדיקה היסטולוגית ונתוני PK/PD. מתן מנה בודדת של SRP-2001 הוכיח כי PPMO התנקה במהירות מהלב (בתוך שעתיים), התנקה מאבי העורקים תוך 4 שעות, אך נמשך בכליות עד לנקודת הזמן של 48 שעות. ddPCR כמותי הדגים פעילות של עיכוב ספייס קריפטי של G608G בכל הרקמות מלבד העור שנבדק עד כה (אבי העורקים, לב, כליות, כבד, ארבע ראשי, עצם), אם כי הפעילות השתנתה בהתאם לרקמה.

פרנסיס, מייק וויין

תְשׁוּבָה:לגבי השאלה, למען האמת, אני לא יודע את התשובה לשאלה הזו. אצל מבוגר טיפוסי, לעומת זאת, איננו מתאמים בין מידת ההסתיידות של המסתם לבין צריכת Mg/Ca, ההסתיידות הכבדה יותר נובעת ככל הנראה מגורמים אחרים.

ד"ר פינאק שאה

תְשׁוּבָה: אני מסכים עם חוות הדעת של ד"ר שאה. ככל הנראה הסיבות להסתיידות המסתמים ב-HGPS שונות מזו שאנו רואים בחולים קשישים. אין לי גם ידע על חילוף החומרים של Ca ו-Mg.

ד"ר פרנצ'סקו מוסומצי

תְשׁוּבָה: ה-Lamin A/C null (למנה^-/-מודל העכבר מפתח DCM מלווה באובדן תפקוד הלב. יתרה מכך, עכברים אלה מציגים פגמים בהולכה לבבית ופיברוזיס לבבי נרחב ומוות מוקדם בגיל 5-8 שבועות (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). עם זאת, דגמי עכברים החסרים רק Lamin A (Fong et al., 2006) או lamin C (Coffinier et al., 2010) אינם מראים מומים לבביים ובעלי תוחלת חיים תקינה.

הפניות:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT, & Marian, AJ (2018). דיכוי של גורמי שעתוק FOXO פעילים בלב מאריך את ההישרדות במודל עכבר של למינופתיות. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). סינתזה ישירה של lamin A, עוקפת עיבוד פרלמין, גורמת לגרעין מעוות בפיברובלסטים אך ללא פתולוגיה ניתנת לזיהוי בעכברים. כתב עת לכימיה ביולוגית, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). נראה ש-Prelamin A ו-lamin A ניתנים להפרדה ברבדים הגרעיניים. כתב העת לחקירה קלינית, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). ביטוי ספציפי לקרדיומיוציטים של lamin A משפר את תפקוד הלב בעכברי Lmna-/-. PLoS ONE, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). אובדן ביטוי למינציה מסוג A פוגע בשלמות המעטפת הגרעינית המוביל לניוון שרירים. כתב העת לביולוגיה של התא, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

שְׁאֵלָה: מ-Tom Misteli: כמה זמן היה הטיפול ב-lonafarnib + tozilizumab בבעלי חיים?
תְשׁוּבָה: ביצענו ניסוי ראשוני בבעלי חיים הטרוזיגוטיים החל משבוע 22 עד שבוע 30. אנו רוצים להתמקד במסגרת זמן זו כדי להעריך את ההשפעה על עלייה במשקל שנצפתה בעבר עם tocilizumab.

שְׁאֵלָה: מסגונזלו: סיפור יפה ג'ובנה וסמי!!! האם ראית תופעות לוואי של טיפול ב- tocilizumab? או כל פנוטיפים שלא שופרו בעכברי פרוגריה? לד"ר ג'ובאנה לטנזי: שאלה: מ-tom misteli: כמה זמן היה הטיפול ב-lonafarnib + tozilizumab בבעלי חיים?
תְשׁוּבָה: תודה לך סוזנה. לא, לא ראינו שום תופעת לוואי של tocilizumab. בין הפנוטיפים שנבדקו (קיפוזיס, ניוון רקמות שומן, פגמים בשיער ובעור, פעילות תנועתית, נגעים באבי העורקים והיפרטרופיה של שריר הלב) עוכבו/שופרו.

הֶעָרָה: מאת MARIE GERHARD-HERMAN: משמש גם בארה"ב למחלות ראומטולוג ודלקת כלי דם
תְגוּבָה: תודה לך מארי על המידע המעניין הזה על השימוש בדלקת כלי דם.

הֶעָרָה: מ-PC stefano: Tocilizumab מאושר גם ביפן לטיפול במחלת Castleman ללא השפעות חיסוניות
תְגוּבָה: תודה לך סטפנו על המידע הזה.

שְׁאֵלָה: מ-Delphine Larrieu: האם אתה רואה ירידה כלשהי בפגיעה ב-DNA בטיפול בפרוג'רינין בתאי HGPS/מודלים של עכבר HGPS?
תְשׁוּבָה: ראינו שגנים הקשורים לתיקון DNA (BRCA1, Rad51 וכו') השתנו לאחר טיפול עם פרוגרינין.

שְׁאֵלָה: מדלפין לאריו: כיצד פועל פרוגרינין אצל ורנר
תסמונת שעד כמה שידוע לי לא מבטאת פרוגרין? האם למולקולה יש מטרות אחרות?
תְשׁוּבָה: תאי WS יכולים גם לייצר כמות קטנה של פרוגרין כמו בגיל רגיל
תאים. צפינו בביטוי פרוגרין בתאי WS ברמות mRNA.
אנו חושבים שחלבון WRN יכול לתפקד כדי לעכב פרוגרין. עם זאת, ב-
במקרה של חולי WS, מכיוון שאין חלבון WRN, ביטוי פרוגרין כן
חשבו להתרחש בשנות ה-20 וה-30, ככל שזה נראה בגיל רגיל
אֲנָשִׁים.

שְׁאֵלָה: מאת בוב בישופ: האם אתר הקישור של פרוגרינין מוגדר ביוכימית או
מבחינה מבנית? האם יש בדיקה ביוכימית למציאת תרכובות נוספות
עם המנגנון הזה?
תְשׁוּבָה: ביצענו בדיקת הורדת חרוזי ביוטין-אבידין וצפינו ב
אינטראקציה ספציפית של פרוגרינין עם פרוגרין אך לא עם lamin A, lamin
B, p53, או אמרין.
ביצענו גם בדיקת אליסה כדי למצוא תרכובות נוספות שיכולות
להיות מעכבי קשירת פרוגרין/למין A משוערים. חלבון רקומביננטי פרוגרין הודגר ברצף עם ספרייה כימית ולמין A.
עם זאת, פרוגרינין היה הכימיקל היעיל ביותר בכימיקל
סִפְרִיָה.

שְׁאֵלָה: מאת ג'ון קוק: התקדמות גדולה ד"ר קים. האם פרוגרינין מפחית את
הפרשת ציטוקינים של SASP?
תְשׁוּבָה: ראינו שפרוגרינין יכול להפחית את הביטוי של IL6 ו-IL8 ב
תאי HGPS.

שְׁאֵלָה: מאת סוזן מיכאליס: האם פרוגרינין זמין לחוקרים?
תְשׁוּבָה: כמובן, זה זמין אם אתה מבקש.

שְׁאֵלָה: מאת Thomas W Glover: אולי פספסתי את זה אבל מה לדעתך זה
מנגנון האחראי להשפעות המיטיבות בתסמונת ורנר?
תְשׁוּבָה: תאים שמקורם בחולי WS מייצרים גם כמות קטנה של פרוגרין, כמו
בדומה לתאים רגילים שמקורם באנשים מבוגרים. פרוגרינין יכול להיות גם
יעיל בתאי WS על ידי הפחתת ביטוי פרוגרין.

תְשׁוּבָה: תודה על השאלה: לא, לא דלקת כשלעצמה. קשור חלקית לדלקת, חקרנו מקרופאגים בפרויקט זה ומצאנו כי נוק-אאוט של Icmt מגביר את זרימת הכולסטרול המקרופאג, הן בזאלי והן בגירוי ApoAI ו-HDL. מכיוון שהשפעה זו קשורה לעיתים להובלה מוגברת של כולסטרול הפוך in vivo, אנו רוצים לקבוע אם Icmt עיכוב יפחית את התפתחות טרשת העורקים.

שְׁאֵלָה: מ-Vandres: האם ניסית תיקון DNA בפיברובלסטים של HGPS אנושיים בגילאים שונים (במבחנה) ובדקת את הנורמליזציה של הפנוטיפ שלהם כדי לראות אם הוא פוחת ככל שהתאים מתבגרים?
תְשׁוּבָה: לא, לא ניסינו תיקון בפיברובלסטים ממטופלים בכמה גילאים שונים - רק משני מטופלים שונים, שהניבו תוצאות דומות.

שְׁאֵלָה: מאת Delphine Larrieu: אפקטים מדהימים! האם הייתם מצפים ל-KO מלא של פרוגרין בעכברים הטרוזיגוטיים?
תְשׁוּבָה: בעכבר בעותק בודד, לא בהכרח הייתי מצפה ליעילות עריכה שונה בהרבה ממה שאנו רואים כיום, מכיוון שכבר אמור להיות עודף של חומר עריכה עבור כל פרוגרין.

שְׁאֵלָה: מאת אנדרה מונטירו דה רוצ'ה: האם אתה חושב שתכנות מחדש של אחוז נמוך של תאים יכול לתקן את תפקוד תאי הגזע, אך עלול להוביל לתשישות תאי גזע בוגרים?
תְשׁוּבָה: אין לנו נתונים שיכולים לספק תשובה לשאלה זו.

שְׁאֵלָה: מאת מיי: נראה כמו cardiomyocyte, מכתים יפה!
מאבי בוכוולטר: האם ביטוי שלילי דומיננטי של Sun1 משבש את כל מתחמי LINC, כולל אלה המתווכים על ידי Sun2?
תְשׁוּבָה: כן, יש ראיות לכך במבחנה בכך שניתן לעקור את כל Nesprins ב-NE על ידי DNSUN1

שְׁאֵלָה: מאת Suet Nee Chen: איך ומה המנגנון שה-AAV9-SunDn מסוגל להשפיע לטווח ארוך? באיזה גיל הזרקת את AAV9-Sun1DN לעכברים המוטנטים של LMNA?
תְשׁוּבָה: הזרקנו את DNSUN1 AAV יום לאחר השראת ה- Cre recombinase למחיקת laminA. יש לנו נתונים שה-DNSUN1 הנמסר על ידי AAV ממשיך להתבטא ב-cardiomyocytes שנה לאחר ההזרקה. אנחנו עושים ניסויי מינון/תזמון/תגובה עכשיו כשחזרנו למעבדה ויכולים ליצור AAV משלנו בכמויות מספיקות

שְׁאֵלָה: מאת Martin Bergö, Viceordförande Kommittén for research: מהי לדעתך התרומה היחסית של lamin A נעד לעומת lamin C בניסויי הנוקאאוט של Lmna שלך?
תְשׁוּבָה: אני לא בטוח לגבי זה אבל Sun1 יוצר אינטראקציה עם LaminA ובעכברי HGPS התרומה חייבת להיות כולה LaminA (ממנו נגזר הפרוג'רין)

שְׁאֵלָה: מאת jcampisi: מהי סיבת המוות ב-SUN1 KO או hets?
תְשׁוּבָה: שאלה טובה שאנחנו עדיין לא יודעים אבל כרגע חושדים באיזו קבוצת שרירי שלד אנחנו צריכים ניתוח היסטורי-פתו הגון של העכברים הגוססים

שְׁאֵלָה: מאת טום מיסטלי: קולין: האם ראית שינויים במסלולי תגובת הלחץ הסלולרי בחיות ה-Lmna/Sun?
תְשׁוּבָה: עדיין לא מדדנו גנים/סמנים של תגובת לחץ בעכברים אלה

שאלה: מדלפין לאריו: האם הייתם חושבים להתמקד רק בלב עם DNSUN1 בחולי HGPS?
תְשׁוּבָה: זה אפשרי בהתחשב בסרוטיפ והשימוש בפרוטור ספציפי לקרדיומיוציטים. הניסויים האלה נמצאים כעת בעיצומם

שְׁאֵלָה:מאת Yuexia Wang: מדוע ל-KO SUN1 יש פחות תועלת בעכברי G609G הומוזיגוטים?
תְשׁוּבָה: כנראה בגלל שהעכברים ההומוזיגוזים מבטאים יותר פרוגרין. אנו רואים אפקט של תגובת האם של הטרוזיגוטים לעומת הומוזיגוטים בניסויים הגנטיים שלנו

שְׁאֵלָה:מרולאן פויזנר: היי קולין, שיחה נחמדה. מהי ההשפעה השלילית של SUN1 מווסת ב-HGPS. רולנד
תְשׁוּבָה: כנראה שיוך מוגבר של רשת MT עם מתחם LINC. ביטוי מוגבר של שמש/נספרין בתאי תרביות משפיע על מיקום גרעיני ועל נדידת תאים

כבוד לפגוש את משפחת באסו ופראו. תודה על השיתוף במסע שלך. אתה באמת והשראה!

תודה למשפחתם של סמי ואלכסנדרה על שהייתם חלק מהסדנה וחלקתם את מסע ההשראה שלכם עם הפרוגריה!

התקדמות פנטסטית אייגר עם אישור באופק.

האם נוכל להאריך את המפגש הזה לסוף השבוע ולהמשיך את הדיון? (תודה לך, אחד וכולם!) 

הסדנה הזו הייתה מדהימה. אני מברך את PRF על המחויבות לעשות את הפעילות הנהדרת הזו. ללא ספק, הסדנה הזו מילאה אותי בידע רב לעתיד שלי. זה היה מדהים. ביחד נמצא את התרופה!

תמיד התרשם מהמדע המרגש במפגשי ה-PRF. כל הכבוד למארגנים על שימור חווית הסדנה הקהילתית גם בפורמט הוירטואלי הזה!

כולכם רוק!!! תודה על ההזדמנות הנהדרת הזו, כשחושבים על לפני שנים רבות, עכשיו זה כמו לחיות בעתיד! שמח להיות חלק מזה

אני מתגעגע לגיטרה של ד"ר קולין. עבודה נהדרת!

תודה רבה על ארגון זה, באמת גולת הכותרת של השבוע שלי!

תודה לכולם ולהתראות באופן אישי בשנה הבאה בקיימברידג'!!

 תודה לכולכם שהצטרפתם אלינו!