ממשלוח של תאים קפואים

תאים קפואים יתקבלו במנות של 1 מ"ל על קרח יבש. שמור תאים קפואים עד להפשרה עבור תרבית תאים או מקום באחסון חנקן נוזלי אם לא מתחילים תרביות מיד. עם זאת, מומלץ שאם אתה מתכוון לאחסן את התאים לשימוש מאוחר יותר, לגדל מלאי טרי ולהקפיא אמפולות מרובות. התאים נשמרים בהקפאה ב-45% RPMI-1640, 50% סרום עגל עוברי ו-5% DMSO (דרגת תרבית רקמה).

1. מניחים 10 מ"ל של RPMI-1640, 15% סרום עגל עוברי (FCS), ± אנטיביוטיקה בבקבוק T-25.
2. אפשר לתקשורת להתאזן באינקובטור לחות של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 באוויר למשך 30 דקות.
3. הפשר כל אמפולה של תאים קפואים באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס או בכוס מים פושרים, אחד בכל פעם.
4. נקה במהירות את החלק החיצוני של האמפולה בעזרת כרית הכנה איזופרופנול סטרילית, ולאחר מכן עטוף את כרית ההכנה סביב האמפולה כדי להגן על האצבעות ולסדוק את החותם על האמפולה בתוך מכסה מנוע בטיחותי ביולוגי.
5. הסר את 1 מ"ל של תאים קפואים עם פיפטת פסטר זכוכית סטרילית והנח בבקבוק T-25 עם 10 מ"ל של מדיום. תווית ברורה לבקבוק כדי לזהות כל שורת תאים.
6. מניחים את התאים באינקובטור לחות של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO 2 באוויר.
7. לאחר 24 שעות הסר 5 מ"ל של מדיום מלמעלה מבלי להפריע לימפוציטים שהתיישבו בתחתית הבקבוק והחליפו ב-5 מ"ל של מדיום שחומם מראש.
8. האכילו את התאים ב-5-6 מ"ל של מדיום טרי כל 3-4 ימים ופוצלו לתרבויות חדשות לפי הצורך.

מתוך משלוח של תרבויות חיות

1. תרביות לימפוציטים חיים יתקבלו בצלוחיות T-25 מלאות עד למעלה ב-RPMI-1640, 15% FCS, 1% Penicillin-Streptomycin (Gibco). המכסים יהיו הדוקים ואטומים בפארפילם.
2. הסר פרפילם.
3. מניחים תרביות באינקובטור לחות של 37 מעלות צלזיוס עם 5% CO2 באוויר ואפשר לתאים להתיישב (20 - 30 דקות).
4. בעזרת פיפטה סטרילית הסר את כל המדיום מלבד 10-15 מ"ל והשליך.
5. הנח את המכסים בחזרה על צלוחיות משוחררות מעט כדי לאפשר חילופי גז (בדוק כדי לוודא שאין חומרי חומר עליהם בחוטי המכסה. אם כן, ייתכן שתרצה להעביר לבקבוק חדש.) הנח את התרבויות בחזרה לאינקובטור עם 5% CO 2באוויר . הם אמורים להתאושש תוך יום או יומיים.
6. האכילו את התאים במדיום טרי כל 3 - 4 ימים על ידי השהייה מחדש של אגרגטים התא והסרת 50 -60% מהנפח והחלפה במדיה טרייה. ניתן להשתמש בתאים שהוסרו מהבקבוק כדי ליזום תרבויות חדשות לפי הצורך.

וונדי נוריס