जमे हुए कोशिकाओं के शिपमेंट से

जमे हुए कोशिकाओं को सूखी बर्फ पर 1 मिली अंश में प्राप्त किया जाएगा। कोशिकाओं को तब तक जमे रहने दें जब तक कि वे कोशिका संवर्धन के लिए पिघल न जाएं या यदि तुरंत संवर्धन शुरू नहीं करना है तो तरल नाइट्रोजन भंडारण में रखें। हालाँकि, यह अनुशंसा की जाती है कि यदि आप बाद में उपयोग के लिए कोशिकाओं को संग्रहीत करने जा रहे हैं, तो ताज़ा स्टॉक उगाएँ और कई एम्पुल्स को फ्रीज करें। कोशिकाओं को 45% RPMI-1640, 50% भ्रूण बछड़े के सीरम और 5% DMSO (ऊतक संवर्धन ग्रेड) में क्रायोप्रिजर्व किया जाता है।

1. आरपीएमआई-1640, 151टीपी3टी भ्रूण बछड़ा सीरम (एफसीएस), ± एंटीबायोटिक्स के 10 मिलीलीटर को टी-25 फ्लास्क में डालें।
2. मीडिया को 37°C आर्द्रतायुक्त इनक्यूबेटर में 5% CO 2 के साथ 30 मिनट तक संतुलित होने दें।
3. जमी हुई कोशिकाओं के प्रत्येक एम्पुल को 37°C जल स्नान या गुनगुने पानी के एक बीकर में एक-एक करके पिघलाएं।
4. जल्दी से एक जीवाणुरहित आइसोप्रोपेनॉल प्रीप पैड से एम्पाउल के बाहरी हिस्से को साफ कर लें, फिर अपनी अंगुलियों की सुरक्षा के लिए प्रीप पैड को एम्पाउल के चारों ओर लपेट लें और एक जैविक सुरक्षा हुड के अंदर एम्पाउल की सील को तोड़ दें।
5. एक स्टेराइल ग्लास पाश्चर पिपेट से 1 मिली जमी हुई कोशिकाओं को निकालें और 10 मिली मीडियम के साथ टी-25 फ्लास्क में रखें। प्रत्येक सेल लाइन की पहचान करने के लिए फ्लास्क पर स्पष्ट रूप से लेबल लगाएँ।
6. कोशिकाओं को 37°C आर्द्रतायुक्त इनक्यूबेटर में 5% CO 2 हवा के साथ रखें।
7. 24 घंटे के बाद फ्लास्क के तल पर जमे लिम्फोसाइटों को नुकसान पहुंचाए बिना ऊपर से 5 मिलीलीटर माध्यम हटा दें और उसके स्थान पर 5 मिलीलीटर पूर्व-गर्म माध्यम डाल दें।
8. कोशिकाओं को हर 3-4 दिन में 5-6 मिली ताजा माध्यम खिलाएं और आवश्यकतानुसार नए संवर्धनों में विभाजित करें।

जीवित संस्कृतियों के शिपमेंट से

1. जीवित लिम्फोसाइट कल्चर को टी-25 फ्लास्क में प्राप्त किया जाएगा, जो आरपीएमआई-1640, 151टीपी3टी एफसीएस, 11टीपी3टी पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमाइसिन (गिबको) से ऊपर तक भरा होगा। ढक्कन टाइट होंगे और पैराफिल्म से सील किए जाएंगे।
2. पैराफिल्म हटाएँ.
3. 5% CO2 के साथ 37°C आर्द्र इनक्यूबेटर में संवर्धन रखें और कोशिकाओं को व्यवस्थित होने दें (20 - 30 मिनट)।
4. एक जीवाणुरहित पिपेट का उपयोग करके 10-15 मिलीलीटर माध्यम को छोड़कर शेष को निकाल दें और त्याग दें।
5. गैस एक्सचेंज की अनुमति देने के लिए कैप को वापस फ्लास्क पर थोड़ा ढीला करके रखें (यह सुनिश्चित करने के लिए जाँच करें कि कैप थ्रेड्स पर मीडिया नहीं है। यदि ऐसा है तो आप एक नए फ्लास्क में स्थानांतरित करना चाह सकते हैं।) संस्कृतियों को 5% CO 2in हवा के साथ इनक्यूबेटर में वापस रखें। उन्हें एक या दो दिन में ठीक हो जाना चाहिए।
6. कोशिकाओं को हर 3 - 4 दिन में ताज़ा माध्यम खिलाएँ, सेल समुच्चयों को फिर से निलंबित करके और 50 -60% वॉल्यूम को हटाकर और ताज़ा मीडिया से प्रतिस्थापित करके। फ्लास्क से निकाली गई कोशिकाओं का उपयोग आवश्यकतानुसार नई संस्कृतियों को आरंभ करने के लिए किया जा सकता है।

वेंडी नोरिस