Menjawab: Studi PK/PD menunjukkan bioavailabilitas 100% di jantung, aorta, dan ginjal. Ginjal adalah satu-satunya jaringan yang menunjukkan adanya akumulasi, berdasarkan pemeriksaan histologis dan data PK/PD. Pemberian dosis tunggal SRP-2001 menunjukkan bahwa PPMO cepat dibersihkan dari jantung (dalam waktu 2 jam), dibersihkan dari aorta dalam waktu 4 jam, tetapi bertahan di ginjal hingga titik waktu 48 jam. ddPCR kuantitatif menunjukkan aktivitas penghambatan sambatan kriptik G608G di semua jaringan kecuali kulit yang diuji sejauh ini (aorta, jantung, ginjal, hati, paha depan, tulang), meskipun aktivitas bervariasi tergantung pada jaringan.

Francis, Mike, dan Wayne

Menjawab:Mengenai pertanyaan tersebut, sejujurnya, saya tidak tahu jawaban untuk pertanyaan ini. Namun, pada orang dewasa pada umumnya, kami tidak menghubungkan tingkat kalsifikasi katup dengan asupan Mg/Ca, kalsifikasi yang lebih berat kemungkinan besar disebabkan oleh faktor-faktor lain.

Dr. Pinak Shah

Menjawab: Saya setuju dengan pendapat Dr. Shah. Mungkin penyebab kalsifikasi katup pada HGPS berbeda dengan yang kita lihat pada pasien lanjut usia. Saya juga tidak memiliki pengetahuan tentang metabolisme Ca dan Mg.

Dr. Francesco Musumeci

Menjawab: Lamin A/C null (Aku tidak mengerti^-/-) model tikus mengalami DCM disertai dengan hilangnya fungsi jantung. Selain itu, tikus-tikus ini menunjukkan cacat pada konduksi jantung dan fibrosis jantung yang luas, serta kematian dini pada usia 5-8 minggu (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Akan tetapi, model tikus yang hanya kekurangan Lamin A (Fong et al., 2006) atau Lamin C (Coffinier et al., 2010) tidak menunjukkan cacat jantung dan memiliki rentang hidup yang normal.

Referensi:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT, & Marian, AJ (2018). Penekanan Faktor Transkripsi FOXO yang Diaktifkan di Jantung Memperpanjang Kelangsungan Hidup pada Model Tikus yang Mengalami Laminopati. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). Sintesis langsung lamin A, yang melewati pemrosesan prelamin a, menyebabkan nukleus yang tidak berbentuk pada fibroblas tetapi tidak terdeteksi patologi pada tikus. Jurnal Kimia Biologi, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Prelamin A dan lamin A tampaknya tidak diperlukan dalam lamina nukleus. Jurnal Investigasi Klinis, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Ekspresi lamin A yang spesifik terhadap kardiomiosit meningkatkan fungsi jantung pada tikus Lmna-/-. PLOS SATU, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). Hilangnya ekspresi lamin tipe A membahayakan integritas selubung nukleus yang menyebabkan distrofi otot. Jurnal Biologi Sel, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Pertanyaan: Dari Tom Misteli: berapa lama pengobatan lonafarnib + tozilizumab pada hewan?
Menjawab: Kami melakukan percobaan pendahuluan pada hewan heterozigot mulai dari minggu ke-22 hingga minggu ke-30. Kami ingin fokus pada jangka waktu ini untuk mengevaluasi efek pada penambahan berat badan yang sebelumnya diamati dengan tocilizumab.

Pertanyaan: Dari Sgonzalo: Kisah yang indah Giovanna dan Sammy!!! Apakah Anda melihat efek samping dari pengobatan tocilizumab? Atau fenotipe apa pun yang tidak membaik pada tikus progeria? Kepada Dr. Giovanna Lattanzi: Pertanyaan: Dari tom misteli: berapa lama pengobatan lonafarnib + tozilizumab pada hewan?
Menjawab: Terima kasih Susana. Tidak, kami tidak melihat adanya efek samping dari tocilizumab. Di antara fenotipe yang diperiksa (kifosis, distrofi jaringan adiposa, kelainan rambut dan kulit, aktivitas lokomotor, lesi aorta, dan hipertrofi miokardium) ada yang tertunda/membaik.

Komentar: Dari MARIE GERHARD-HERMAN: Juga digunakan di AS untuk penyakit reumatologi dan vaskulitis
Membalas: Terima kasih Marie atas info menarik ini tentang penggunaan vaskulitis.

Komentar: Dari pc stefano: Tocilizumab juga disetujui di Jepang untuk mengobati penyakit Castleman tanpa efek imunosupresif
Membalas: Terima kasih Stefano atas info ini.

Pertanyaan: Dari Delphine Larrieu: apakah Anda melihat adanya penurunan kerusakan DNA setelah pengobatan progerinin pada sel HGPS/model tikus HGPS?
Menjawab: Kami mengamati bahwa gen terkait perbaikan DNA (BRCA1, Rad51, dll) diubah setelah pengobatan dengan progerinin.

Pertanyaan: Dari Delphine Larrieu: Bagaimana cara kerja progerinin pada Werner
Sindrom yang – sejauh pengetahuan saya – tidak mengekspresikan progerin? Apakah molekul tersebut memiliki target lain?
Menjawab: Sel WS juga dapat menghasilkan sejumlah kecil progerin seperti sel normal
sel. Kami mengamati ekspresi progerin dalam sel WS pada tingkat mRNA.
Kami menduga bahwa protein WRN dapat berfungsi untuk menghambat progerin. Namun, dalam
pada kasus pasien WS, karena tidak ada protein WRN, ekspresi progerin adalah
diperkirakan terjadi pada usia 20-an dan 30-an, sama seperti yang terlihat pada usia normal
rakyat.

Pertanyaan: Dari Bob Bishop: Apakah situs pengikatan progerinin ditentukan secara biokimia atau
secara struktural? Apakah ada uji biokimia untuk menemukan senyawa tambahan?
dengan mekanisme ini?
Menjawab: Kami melakukan uji tarik-turun manik biotin-avidin dan mengamati
interaksi spesifik perogerinin dengan progerin tetapi tidak dengan lamin A, lamin
B, p53, atau emerin.
Kami juga melakukan uji Elisa untuk menemukan senyawa tambahan yang dapat
diduga sebagai penghambat pengikat progerin/lamin A. Protein rekombinan progerin diinkubasi secara berurutan dengan perpustakaan kimia dan lamin A.
Namun, progerinin adalah bahan kimia yang paling efektif dalam kimia
perpustakaan.

Pertanyaan: Dari John Cooke: Kemajuan yang hebat, Dr. Kim. Apakah Progerinin mengurangi
sekresi sitokin SASP?
Menjawab: Kami mengamati bahwa progerinin dapat mengurangi ekspresi IL6 dan IL8 di
Sel HGPS.

Pertanyaan: Dari Susan Michaelis: apakah progerinin tersedia untuk peneliti?
Menjawab: Tentu saja tersedia jika Anda memintanya.

Pertanyaan: Dari Thomas W Glover: Saya mungkin melewatkannya, tetapi menurut Anda apa
mekanisme yang bertanggung jawab atas efek menguntungkan pada sindrom Werner?
Menjawab: Sel yang berasal dari pasien WS juga menghasilkan sejumlah kecil progerin, seperti
seperti sel normal yang berasal dari orang lanjut usia. Progerinin juga dapat
efektif pada sel WS dengan mengurangi ekspresi progerin.

Menjawab: Terima kasih atas pertanyaannya: Tidak, bukan peradangan itu sendiri. Sebagian terkait dengan peradangan, kami telah mempelajari makrofag dalam proyek ini dan menemukan bahwa penghapusan ICMT (Informasi Teknis) meningkatkan aliran kolesterol makrofag, baik basal maupun yang distimulasi oleh ApoAI dan HDL. Karena efek ini terkadang dikaitkan dengan peningkatan transportasi kolesterol terbalik secara in vivo, kami ingin menentukan apakah ICMT (Informasi Teknis) penghambatan akan mengurangi perkembangan aterosklerosis.

Pertanyaan: Dari vandres: pernahkah Anda mencoba koreksi DNA pada fibroblas HGPS manusia dengan usia berbeda (in vitro) dan menguji normalisasi fenotipe mereka untuk melihat apakah itu menurun seiring bertambahnya usia sel?
Menjawab: Tidak, kami belum mencoba koreksi pada fibroblas dari pasien dengan beberapa usia berbeda—hanya dari dua pasien berbeda, yang menghasilkan hasil serupa.

Pertanyaan: Dari Delphine Larrieu: Efek yang luar biasa! Apakah Anda mengharapkan KO progerin yang lengkap pada tikus heterozigot?
Menjawab: Pada tikus salinan tunggal, saya tidak akan mengharapkan efisiensi penyuntingan yang jauh berbeda dari apa yang kita amati saat ini, karena seharusnya sudah ada kelebihan agen penyunting untuk setiap progerin.

Pertanyaan: Dari Andre Monteiro Da Rocha: Apakah Anda berpendapat bahwa pemrograman ulang sebagian kecil sel dapat memperbaiki fungsi sel punca, tetapi dapat menyebabkan habisnya sel punca dewasa?
Menjawab: Kami tidak memiliki data yang dapat memberikan jawaban atas pertanyaan ini.

Pertanyaan: Dari Mei: Tampak seperti kardiomiosit, pewarnaannya indah!
Dari Abby Buchwalter: Apakah ekspresi dominan negatif Sun1 mengganggu semua kompleks LINC, termasuk yang dimediasi oleh Sun2?
Menjawab: Ya, ada bukti untuk ini secara in vitro bahwa semua Nesprin di NE dapat digantikan oleh DNSUN1

Pertanyaan: Dari Suet Nee Chen: bagaimana dan apa mekanisme yang membuat AAV9-SunDn mampu memberikan efek jangka panjang? Pada umur berapa Anda menyuntikkan AAV9-Sun1DN ke tikus mutan LMNA?
Menjawab: Kami menyuntikkan DNSUN1 AAV sehari setelah menginduksi rekombinase Cre untuk menghapus laminA. Kami memiliki data bahwa DNSUN1 yang diberikan oleh AAV terus diekspresikan dalam kardiomiosit setahun setelah penyuntikan. Kami melakukan eksperimen dosis/waktu/respons sekarang setelah kami kembali ke laboratorium dan dapat membuat AAV kami sendiri dalam jumlah yang cukup.

Pertanyaan: Dari Martin Bergö, Viceordförande Kommittén untuk forskning: Menurut Anda apa kontribusi relatif dari tidak adanya lamin A versus lamin C dalam eksperimen sistem gugur Lmna Anda?
Menjawab: Saya tidak yakin tentang ini tetapi Sun1 berinteraksi dengan LaminA dan pada tikus HGPS kontribusinya pasti semua LaminA (yang merupakan asal progerin)

Pertanyaan: Dari jcampisi: Apa penyebab kematian pada SUN1 KO atau hets?
Menjawab: Pertanyaan bagus, kami masih belum tahu, tapi saat ini kami menduga ada beberapa kelompok otot rangka. Kami perlu melakukan analisis histo-patologi yang layak terhadap tikus yang sekarat.

Pertanyaan: Dari Tom Misteli: Colin: apakah Anda melihat perubahan dalam jalur respons stres seluler pada hewan Lmna/Sun?
Menjawab: Kami belum mengukur gen/penanda respons stres apa pun pada tikus ini

Pertanyaan: Dari Delphine Larrieu: Apakah Anda membayangkan menargetkan hanya jantung dengan DNSUN1 pada pasien HGPS?
Menjawab: Hal itu dimungkinkan mengingat serotipe dan penggunaan promotor spesifik kardiomiosit. Percobaan tersebut saat ini sedang berlangsung.

Pertanyaan:Dari Yuexia Wang: Mengapa KO SUN1 kurang bermanfaat pada tikus homozigot G609G?
Menjawab: Mungkin karena tikus homozigot mengekspresikan lebih banyak Progerin. Kami melihat efek respons heterozigot terhadap homozigot dalam eksperimen genetik kami

Pertanyaan:Dari Roland Foisner: Hai Colin, pembicaraan yang bagus. Apa efek negatif dari SUN1 yang meningkat pada HGPS. Roland
Menjawab: Kemungkinan peningkatan asosiasi jaringan MT dengan kompleks LINC. Peningkatan ekspresi Sun/Nesprin dalam kultur sel mempengaruhi posisi inti dan migrasi sel

Suatu kehormatan bisa bertemu dengan keluarga Basso dan Peraut. Terima kasih telah berbagi kisah perjalanan Anda. Anda sungguh inspiratif!

Terima kasih keluarga Sami dan Alexandra karena telah menjadi bagian dari lokakarya dan berbagi perjalanan inspiratif Anda dengan progeria!

Kemajuan yang fantastis Eiger dengan persetujuan di cakrawala.

Bisakah kita memperpanjang sesi ini hingga akhir minggu dan melanjutkan diskusi? (TERIMA KASIH, semuanya!) 

Lokakarya ini luar biasa. Saya mengucapkan selamat kepada PRF karena telah berkomitmen untuk melakukan kegiatan hebat ini. Tidak diragukan lagi, lokakarya ini memberi saya banyak pengetahuan untuk masa depan saya. Luar biasa. Bersama-sama kita akan menemukan obatnya!

Selalu terkesan dengan sains yang menarik di pertemuan PRF. Banyak pujian untuk penyelenggara karena tetap menjaga pengalaman lokakarya komunitas bahkan dalam format virtual ini!

Kalian semua HEBAT!!! Terima kasih atas kesempatan yang luar biasa ini, mengingat masa lalu, sekarang rasanya seperti hidup di masa depan! Senang bisa menjadi bagian darinya

Saya kangen gitar Dr. Collin. Kerja bagus!

Terima kasih banyak telah menyelenggarakan ini, benar-benar momen puncak minggu saya!

Terima kasih kepada semuanya dan sampai jumpa tahun depan di Cambridge!!

 Terima kasih semuanya telah bergabung dengan kami!