Dari Pengiriman Sel Beku

Sel beku akan diterima dalam alikuot 1 ml pada es kering. Simpan sel beku hingga dicairkan untuk kultur sel atau simpan dalam penyimpanan nitrogen cair jika tidak segera memulai kultur. Namun, jika Anda akan menyimpan sel untuk penggunaan selanjutnya, sebaiknya buat stok segar dan bekukan beberapa ampul. Sel dikriopreservasi dalam 45% RPMI-1640, 50% fetal calf serum, dan 5% DMSO (tingkat kultur jaringan).

1. Tempatkan 10 ml RPMI-1640, 15% fetal calf serum (FCS), ±antibiotik dalam labu T-25.
2. Biarkan media mencapai keseimbangan dalam inkubator humidifikasi 37°C dengan 5% CO2 di udara selama 30 menit.
3. Cairkan setiap ampul sel beku dalam air bersuhu 37°C atau gelas kimia berisi air hangat, satu per satu.
4. Segera bersihkan bagian luar ampul dengan bantalan persiapan isopropanol steril, kemudian lilitkan bantalan persiapan di seputar ampul untuk melindungi jari dan membuka segel ampul di dalam tudung pengaman biologis.
5. Ambil 1 ml sel beku dengan pipet Pasteur kaca steril dan tempatkan dalam labu T-25 dengan 10 ml medium. Beri label pada labu dengan jelas untuk mengidentifikasi setiap lini sel.
6. Tempatkan sel dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37°C dengan 5% CO2 di udara.
7. Setelah 24 jam, keluarkan 5 ml medium dari atas tanpa mengganggu limfosit yang mengendap di dasar labu dan ganti dengan 5 ml medium yang telah dihangatkan sebelumnya.
8. Beri sel dengan 5 – 6 ml media segar setiap 3 – 4 hari dan bagi menjadi kultur baru sesuai kebutuhan.

Dari Pengiriman Kultur Hidup

1. Kultur limfosit hidup akan diterima dalam tabung T-25 yang diisi penuh dengan RPMI-1640, 15% FCS, 1% Penicillin-Streptomycin (Gibco). Tutupnya akan rapat dan disegel dengan parafilm.
2. Hilangkan parafilm.
3. Letakkan kultur dalam inkubator yang dilembabkan pada suhu 37°C dengan 5% CO2 di udara dan biarkan sel mengendap (20 – 30 menit).
4. Dengan menggunakan pipet steril, ambil semua media kecuali 10 – 15 ml dan buang.
5. Pasang kembali tutup pada labu yang dilonggarkan sedikit untuk memungkinkan pertukaran gas (Periksa untuk memastikan ulir tutup tidak berisi media. Jika demikian, Anda mungkin ingin memindahkannya ke labu baru.) Letakkan kembali kultur ke dalam inkubator dengan 5% CO2 di udara. Kultur akan pulih dalam satu atau dua hari.
6. Beri sel dengan media segar setiap 3 – 4 hari dengan cara mensuspensikan kembali agregat sel dan membuang 50 -60% dari volume dan menggantinya dengan media segar. Sel yang dikeluarkan dari tabung dapat digunakan untuk memulai kultur baru sesuai kebutuhan.

Wendy Norris