냉동 세포 배송에서

동결된 세포는 건조 얼음 위에 1ml 분량으로 제공됩니다. 세포 배양을 위해 해동할 때까지 세포를 동결 상태로 유지하거나, 바로 배양을 시작하지 않을 경우 액체 질소 보관소에 보관합니다. 그러나 나중에 사용하기 위해 세포를 보관하려는 경우 신선한 스톡을 배양하고 여러 앰플을 동결하는 것이 좋습니다. 세포는 45% RPMI-1640, 50% 태아 송아지 혈청 및 5% DMSO(조직 배양 등급)에서 냉동 보관합니다.

1. T-25 플라스크에 RPMI-1640, 15% 태아송아지혈청(FCS), ±항생제 10ml를 넣습니다.
2. 배지가 37°C 습도 인큐베이터에서 5% CO 2를 공기 중에 넣고 30분 동안 평형을 이루도록 합니다.
3. 냉동된 세포의 각 앰플을 37°C 수조나 미지근한 물이 담긴 비이커에 하나씩 넣어 녹입니다.
4. 멸균된 이소프로판올 세정 패드로 앰플 외부를 빨리 닦은 다음, 세정 패드를 앰플 주위에 감아 손가락을 보호하고 생물학적 안전 후드 안에서 앰플의 밀봉을 깨세요.
5. 멸균 유리 파스퇴르 피펫으로 동결된 세포 1ml를 꺼내고 10ml의 배지가 있는 T-25 플라스크에 넣습니다. 각 세포주를 식별하기 위해 플라스크에 명확하게 라벨을 붙입니다.
6. 세포를 공기 중에 5% CO 2가 들어 있는 37°C 습도 인큐베이터에 넣습니다.
7. 24시간 후 플라스크 바닥에 가라앉은 림프구를 건드리지 않고 위쪽에서 배지 5ml를 제거하고, 미리 데워둔 배지 5ml로 교체합니다.
8. 3~4일마다 5~6ml의 신선한 배지를 세포에 공급하고 필요에 따라 새로운 배양으로 나눕니다.

살아있는 문화의 배송에서

1. 살아있는 림프구 배양물은 RPMI-1640, 15% FCS, 1% 페니실린-스트렙토마이신(Gibco)으로 가득 채워진 T-25 플라스크에 담겨 제공됩니다. 뚜껑은 단단히 닫히고 파라필름으로 밀봉됩니다.
2. 파라필름을 제거하세요.
3. 37°C 습도 인큐베이터에 배양액을 넣고 공기 중에 5% CO2를 넣고 세포가 가라앉도록 합니다(20~30분).
4. 멸균 피펫을 사용하여 배지를 10~15ml만 남기고 모두 제거하여 버립니다.
5. 가스 교환을 허용하기 위해 플라스크에 캡을 약간 느슨하게 다시 씌웁니다(캡 나사산에 배지가 없는지 확인합니다. 배지가 있는 경우 새 플라스크로 옮기는 것이 좋습니다.) 배양물을 공기 중 5% CO 2가 있는 인큐베이터에 다시 넣습니다. 하루나 이틀 안에 회복될 것입니다.
6. 세포 응집물을 재부유시키고 부피의 50-60%를 제거하고 신선한 배지로 교체하여 3~4일마다 세포에 신선한 배지를 공급합니다. 플라스크에서 제거한 세포는 필요에 따라 새로운 배양을 시작하는 데 사용할 수 있습니다.

웬디 노리스