फ्रोझन सेलच्या शिपमेंटमधून

गोठवलेल्या पेशी कोरड्या बर्फावर 1 मिली अलिकोट्समध्ये प्राप्त होतील. सेल कल्चरसाठी वितळत नाही तोपर्यंत पेशी गोठवून ठेवा किंवा लगेच कल्चर सुरू न केल्यास द्रव नायट्रोजन स्टोरेजमध्ये ठेवा. तथापि, अशी शिफारस केली जाते की आपण नंतर वापरासाठी पेशी संचयित करणार असाल तर, ताजे साठा वाढवा आणि एकाधिक ampoules गोठवा. पेशी 45% RPMI-1640, 50% गर्भाच्या वासराच्या सीरममध्ये आणि 5% DMSO (टिश्यू कल्चर ग्रेड) मध्ये क्रायोप्रीझर्व्ह केल्या जातात.

1. T-25 फ्लास्कमध्ये 10 मिली RPMI-1640, 15% फेटल काफ सीरम (FCS), ±अँटीबायोटिक्स ठेवा.
2. मीडियाला 37 डिग्री सेल्सिअस आर्द्रता असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये 30 मिनिटांसाठी 5% CO 2 हवेसह समतोल होऊ द्या.
3. गोठलेल्या पेशींचे प्रत्येक एम्पौल 37°C पाण्याच्या आंघोळीत किंवा कोमट पाण्याच्या बीकरमध्ये, एका वेळी एक.
4. निर्जंतुकीकरण आयसोप्रोपॅनॉल प्रीप पॅडसह एम्पौलच्या बाहेरील भाग द्रुतपणे साफ करा, नंतर बोटांचे संरक्षण करण्यासाठी एम्पौलभोवती प्रीप पॅड गुंडाळा आणि जैविक सुरक्षा हुडच्या आत एम्पौलवरील सील क्रॅक करा.
5. 1 मिली गोठलेल्या पेशी निर्जंतुकीकरण ग्लास पाश्चर पाइपेटने काढून टाका आणि 10 मिली मध्यम असलेल्या T-25 फ्लास्कमध्ये ठेवा. प्रत्येक सेल लाइन ओळखण्यासाठी फ्लास्कला स्पष्टपणे लेबल करा.
6. पेशींना हवेत 5% CO 2 सह 37°C आर्द्रता असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये ठेवा.
7. 24 तासांनंतर फ्लास्कच्या तळाशी स्थायिक झालेल्या लिम्फोसाइट्सला त्रास न देता वरून 5 मिली माध्यम काढून टाका आणि 5 मिली पूर्व-उबदार माध्यमाने बदला.
8. पेशींना दर 3-4 दिवसांनी 5 - 6 मिली ताजे माध्यम द्या आणि आवश्यकतेनुसार नवीन संस्कृतींमध्ये विभाजित करा.

थेट संस्कृतींच्या शिपमेंटमधून

1. RPMI-1640, 15% FCS, 1% पेनिसिलिन-स्ट्रेप्टोमायसिन (Gibco) सह शीर्षस्थानी भरलेल्या T-25 फ्लास्कमध्ये थेट लिम्फोसाइट संस्कृती प्राप्त होतील. टोप्या घट्ट आणि पॅराफिल्मने सील केल्या जातील.
2. पॅराफिल्म काढा.
3. 5% CO2 सह 37°C आर्द्रता असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये कल्चर ठेवा आणि पेशी बाहेर पडू द्या (20 - 30 मिनिटे).
4. निर्जंतुकीकरण पाईपेट वापरुन 10 - 15 मि.ली. वगळता सर्व काढून टाका आणि टाकून द्या.
5. गॅस एक्सचेंजला परवानगी देण्यासाठी फ्लास्कवर कॅप्स थोडेसे सैल करा (कॅप थ्रेड्सवर मीडिया नसल्याचे सुनिश्चित करण्यासाठी तपासा. तसे असल्यास तुम्हाला नवीन फ्लास्कमध्ये स्थानांतरित करायचे असेल.) 5% CO 2in हवा असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये कल्चर परत ठेवा. . ते एक-दोन दिवसांत बरे व्हावेत.
6. सेल एग्रीगेट्स पुन्हा निलंबित करून आणि व्हॉल्यूमचे 50 -60% काढून आणि ताज्या माध्यमाने बदलून दर 3-4 दिवसांनी पेशींना ताजे माध्यम द्या. फ्लास्कमधून काढून टाकलेल्या पेशी आवश्यकतेनुसार नवीन संस्कृती सुरू करण्यासाठी वापरल्या जाऊ शकतात.

वेंडी नॉरिस