Antwoord: PK/PD-onderzoeken gaven aan dat 100% biologisch beschikbaar is in het hart, de aorta en de nieren. De nieren waren het enige weefsel waar een aanwijzing was voor accumulatie, gebaseerd op histologisch onderzoek en PK/PD-gegevens. Toediening van een enkele dosis SRP-2001 toonde aan dat PPMO snel uit het hart werd verwijderd (binnen 2 uur), binnen 4 uur uit de aorta werd verwijderd, maar in de nieren tot het 48-uurs tijdpunt werd gehandhaafd. Kwantitatieve ddPCR toonde G608G cryptische splice-inhiberende activiteit in alle weefsels behalve de huid die tot nu toe zijn getest (aorta, hart, nier, lever, quadriceps, bot), hoewel de activiteit varieerde afhankelijk van het weefsel.

Francis, Mike en Wayne

Antwoord:Wat betreft de vraag, om eerlijk te zijn, weet ik het antwoord op deze vraag niet. Bij een typische volwassene correleren we echter niet de mate van klepverkalking met Mg/Ca-inname, de zwaardere verkalking is waarschijnlijk te wijten aan andere factoren.

Dokter Pinak Shah

Antwoord: Ik ben het eens met de mening van Dr. Shah. Waarschijnlijk zijn de oorzaken van klepverkalking bij HGPS anders dan die we zien bij oudere patiënten. Ik heb ook geen kennis over Ca- en Mg-metabolisme.

Dr. Francesco Musumeci

Antwoord: De lamin A/C nul (Lmna^-/-) muismodel ontwikkelt DCM gepaard gaand met verlies van hartfunctie. Bovendien vertonen deze muizen defecten in de hartgeleiding en uitgebreide hartfibrose, en vroegtijdige dood op 5-8 weken leeftijd (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Echter, muismodellen die alleen Lamin A (Fong et al., 2006) of lamin C (Coffinier et al., 2010) missen, vertonen geen hartafwijkingen en hebben een normale levensduur.

Referenties:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT, & Marian, AJ (2018). Onderdrukking van geactiveerde FOXO-transcriptiefactoren in het hart verlengt de overleving in een muizenmodel van laminopathieën. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). Directe synthese van lamin A, waarbij de prelamin a-verwerking wordt omzeild, veroorzaakt misvormde kernen in fibroblasten, maar geen detecteerbare pathologie bij muizen. Tijdschrift voor biologische chemie, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Prelamine A en lamine A lijken overbodig te zijn in de nucleaire lamina. Het tijdschrift voor klinisch onderzoek, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Cardiomyocyt-specifieke expressie van lamin A verbetert de hartfunctie bij Lmna-/- muizen. PLoS EEN, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). Verlies van A-type lamin-expressie brengt de integriteit van de kernenvelop in gevaar, wat leidt tot spierdystrofie. Het tijdschrift voor celbiologie, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Vraag: Van Tom Misteli: Hoe lang duurde de behandeling met lonafarnib + tozilizumab bij dieren?
Antwoord: We hebben een voorlopig experiment uitgevoerd bij heterozygote dieren, beginnend bij week 22 tot en met week 30. We willen ons richten op dit tijdsbestek om het effect op gewichtstoename te evalueren dat eerder werd waargenomen met tocilizumab.

Vraag: Van Sgonzalo: Prachtig verhaal Giovanna en Sammy!!! Zag je bijwerkingen van de tocilizumab-behandeling? Of fenotypes die niet verbeterden bij progeria-muizen? Aan Dr. Giovanna Lattanzi: Vraag: Van Tom Misteli: hoe lang duurde de behandeling met lonafarnib + tozilizumab bij dieren?
Antwoord: Dankjewel Susana. Nee, we zagen geen bijwerkingen van tocilizumab. Onder de onderzochte fenotypes (kyfose, vetweefseldystrofie, haar- en huiddefecten, locomotorische activiteit, aorta-laesies en myocardiumhypertrofie) waren vertraagd/verbeterd.

Opmerking: Van MARIE GERHARD-HERMAN: Wordt ook in de VS gebruikt voor reumatologische aandoeningen en vasculitis
Antwoord: Dank je wel Marie voor deze interessante informatie over het gebruik bij vasculitis.

Opmerking: Van pc stefano: Tocilizumab is ook in Japan goedgekeurd voor de behandeling van de ziekte van Castleman zonder immunosuppressieve effecten
Antwoord: Bedankt Stefano voor deze informatie.

Vraag: Van Delphine Larrieu: ziet u een afname van DNA-schade na behandeling met progerinine in HGPS-cellen/HGPS-muismodellen?
Antwoord: We zagen dat genen die verband houden met DNA-herstel (BRCA1, Rad51, etc.) veranderden na behandeling met progerinine.

Vraag: Van Delphine Larrieu: Hoe werkt progerinine bij Werner
Syndroom dat – voor zover ik weet – geen progerine tot expressie brengt? Heeft het molecuul andere targets?
Antwoord: WS-cellen kunnen ook een kleine hoeveelheid progerine produceren, net als normale oudere cellen.
cellen. We observeerden progerine-expressie in WS-cellen op mRNA-niveaus.
Wij denken dat WRN-eiwitten progerine kunnen remmen. Echter, in de
Bij WS-patiënten is er geen WRN-eiwit, dus de progerine-expressie is
wordt verondersteld voor te komen in de jaren 20 en 30, net zoveel als bij normaal bejaard
mensen.

Vraag: Van Bob Bishop: Is de progerinine-bindingsplaats biochemisch gedefinieerd of
structureel? Is er een biochemische test om extra verbindingen te vinden
met dit mechanisme?
Antwoord: We hebben een biotine-avidine bead pull-down assay uitgevoerd en de
specifieke interactie van perogerinine met progerine maar niet met lamin A, lamin
B, p53 of emerine.
We hebben ook een Elisa-test uitgevoerd om aanvullende verbindingen te vinden die
vermoedelijke progerine/lamin A-bindende remmers zijn. Progerine recombinant eiwit werd sequentieel geïncubeerd met een chemische bibliotheek en lamin A.
Progerinine was echter de meest effectieve chemische stof in de chemische
bibliotheek.

Vraag: Van John Cooke: Grote vooruitgang Dr. Kim. Vermindert Progerinin de
secretie van SASP-cytokinen?
Antwoord: We hebben waargenomen dat progerinine de expressie van IL6 en IL8 in
HGPS-cellen.

Vraag: Van Susan Michaelis: is progerinine beschikbaar voor onderzoekers?
Antwoord: Uiteraard is dit mogelijk als u erom vraagt.

Vraag: Van Thomas W Glover: Ik heb het misschien gemist, maar wat denk je dat de
Welk mechanisme is verantwoordelijk voor de gunstige effecten bij het Werner-syndroom?
Antwoord: Cellen afkomstig van WS-patiënten produceren ook een kleine hoeveelheid progerine, zoals
net als normale cellen afkomstig van oudere mensen. Progerinine kan ook
effectief in WS-cellen door de progerine-expressie te verminderen.

Antwoord: Bedankt voor de vraag: Nee, niet per se ontsteking. Gedeeltelijk gerelateerd aan ontsteking, hebben we macrofagen bestudeerd in dit project en ontdekt dat knockout van Icmt in verhoogt macrofaag cholesterol efflux, zowel basaal als ApoAI- en HDL-gestimuleerd. Aangezien dit effect soms geassocieerd wordt met verhoogd omgekeerd cholesterol transport in vivo, willen we bepalen of Icmt Remming zou de ontwikkeling van atherosclerose verminderen.

Vraag: Vandres: hebt u DNA-correctie geprobeerd in menselijke HGPS-fibroblasten van verschillende leeftijden (in vitro) en de normalisatie van hun fenotype getest om te zien of dit afneemt naarmate de cellen ouder worden?
Antwoord: Nee, we hebben geen correctie geprobeerd in fibroblasten van patiënten van verschillende leeftijden. We hebben het alleen geprobeerd bij twee verschillende patiënten, wat vergelijkbare resultaten opleverde.

Vraag: Van Delphine Larrieu: Geweldige effecten! Zou je een complete progerine KO verwachten bij heterozygote muizen?
Antwoord: Bij de muis met één kopie verwacht ik niet per se een veel andere bewerkingsefficiëntie dan wat we momenteel waarnemen, omdat er al een overschot aan bewerkingsmiddel voor elke progerine zou moeten zijn.

Vraag: Van Andre Monteiro Da Rocha: Denkt u dat herprogrammering van een klein percentage cellen de stamcelfunctie kan herstellen, maar dat dit kan leiden tot uitputting van volwassen stamcellen?
Antwoord: Er zijn geen gegevens beschikbaar waarmee we deze vraag kunnen beantwoorden.

Vraag: Van Mei: Lijkt op een cardiomyocyt, mooie kleuring!
Van Abby Buchwalter: Verstoort dominante negatieve Sun1-expressie alle LINC-complexen, inclusief die welke gemedieerd worden door Sun2?
Antwoord: Ja, er is bewijs hiervoor in vitro, aangezien alle Nesprins in het NE kunnen worden verdrongen door DNSUN1

Vraag: Van Suet Nee Chen: hoe en wat is het mechanisme waardoor AAV9-SunDn een langetermijneffect kan hebben? Op welke leeftijd injecteerde u AAV9-Sun1DN bij de LMNA-mutante muizen?
Antwoord: We injecteerden de DNSUN1 AAV een dag nadat we de Cre-recombinase hadden geïnduceerd om laminA te verwijderen. We hebben gegevens dat de DNSUN1 die door AAV wordt geleverd, een jaar na injectie nog steeds tot expressie komt in de cardiomyocyten. We doen nu dosis-/timing-/responsexperimenten nu we weer in het lab zijn en onze eigen AAV in voldoende hoeveelheden kunnen maken.

Vraag: Van Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Wat is volgens u de relatieve bijdrage van het afwezige lamin A versus lamin C in uw Lmna knock-out-experimenten?
Antwoord: Ik weet het niet zeker, maar Sun1 interageert met LaminA en bij de HGPS-muizen moet de bijdrage volledig uit LaminA bestaan (waarvan progerine is afgeleid).

Vraag: Van jcampisi: Wat is de doodsoorzaak in SUN1 KO of hets?
Antwoord: Goede vraag, we weten het nog steeds niet, maar vermoeden momenteel dat het om een skeletspiergroep gaat. We moeten een behoorlijke histopathologische analyse van de stervende muizen doen.

Vraag: Van Tom Misteli: Colin: heb je veranderingen gezien in de cellulaire stressreactiepaden bij de Lmna/Sun-dieren?
Antwoord: We hebben nog geen stressresponsgenen/markers gemeten bij deze muizen

Vraag: Van Delphine Larrieu: Zou u overwegen om DNSUN1 alleen op het hart toe te passen bij HGPS-patiënten?
Antwoord: Dat is mogelijk gezien het serotype en het gebruik van een cardiomyocyt-specifieke promotor. Die experimenten zijn momenteel gaande

Vraag:Van Yuexia Wang: Waarom heeft KO SUN1 minder voordeel bij homozygote G609G-muizen?
Antwoord: Waarschijnlijk omdat de homozygote muizen meer Progerin tot expressie brengen. We zien een does-responseffect van heterozygoten versus homozygoten in onze genetische experimenten

Vraag:Van Roland Foisner: Hoi Colin, leuk gesprek. Wat is het negatieve effect van upregulated SUN1 in HGPS. Roland
Antwoord: Waarschijnlijk toegenomen associatie van het MT-netwerk met het LINC-complex. Toegenomen Sun/Nesprin-expressie in kweekcellen beïnvloedt nucleaire positionering en celmigratie

Een eer om de familie Basso en Peraut te ontmoeten. Bedankt voor het delen van jullie reis. Jullie zijn echt een inspiratie!

Hartelijk dank aan Sami en Alexandra's familie voor jullie deelname aan de workshop en het delen van jullie inspirerende reis met progeria!

Fantastische vooruitgang Eiger, met goedkeuring in het verschiet.

Kunnen we deze sessie verlengen tot het einde van de week en de discussie voortzetten? (BEDANKT, iedereen!) 

Deze workshop was geweldig. Ik feliciteer de PRF met de toewijding om deze geweldige activiteit te doen. Zonder twijfel heeft deze workshop mij veel kennis voor mijn toekomst gegeven. Het was geweldig. Samen vinden we de remedie!

Altijd onder de indruk van de opwindende wetenschap op de PRF-bijeenkomsten. Veel lof voor de organisatoren voor het behouden van de community workshop-ervaring, zelfs in dit virtuele formaat!

Jullie zijn allemaal GEWELDIG!!! Bedankt voor deze geweldige kans, denkend aan vele jaren geleden, is het nu alsof we in de toekomst leven! Blij om er deel van uit te maken

Ik mis Dr. Collins gitaar. Goed gedaan!

Hartelijk dank voor het organiseren hiervan, het was echt het hoogtepunt van mijn week!

Bedankt allemaal en tot volgend jaar in Cambridge!!

 Bedankt dat jullie allemaal bij ons zijn!