Van verzending van bevroren cellen

Bevroren cellen worden ontvangen in 1 ml aliquots op droogijs. Houd cellen bevroren tot ze ontdooid zijn voor celkweek of bewaar ze in vloeibare stikstof als u niet meteen met kweken begint. Het wordt echter aanbevolen om, als u de cellen wilt bewaren voor later gebruik, verse voorraden te kweken en meerdere ampullen in te vriezen. De cellen worden cryopreserveerd in 45% RPMI-1640, 50% foetaal kalfsserum en 5% DMSO (weefselkweekkwaliteit).

1. Doe 10 ml RPMI-1640, 15% foetaal kalfsserum (FCS), ±antibiotica in een T-25-flesje.
2. Laat de media gedurende 30 minuten in evenwicht komen in een bevochtigde incubator van 37°C met 5% CO2 in lucht.
3. Ontdooi elke ampul met bevroren cellen één voor één in een waterbad van 37°C of in een beker met lauw water.
4. Maak de buitenkant van de ampul snel schoon met een steriel isopropanol-preppad. Wikkel het preppad vervolgens om de ampul om uw vingers te beschermen en breek de verzegeling van de ampul in een biologische veiligheidskap.
5. Verwijder de 1 ml bevroren cellen met een steriele glazen Pasteur-pipet en plaats in een T-25-kolf met 10 ml medium. Label de kolf duidelijk om elke cellijn te identificeren.
6. Plaats de cellen in een bevochtigde broedstoof van 37°C met 5% CO2 in de lucht.
7. Verwijder na 24 uur 5 ml medium van bovenaf, zonder de lymfocyten op de bodem van de kolf te verstoren, en vervang dit door 5 ml voorverwarmd medium.
8. Geef de cellen elke 3 tot 4 dagen 5 tot 6 ml vers medium en verdeel ze indien nodig in nieuwe culturen.

Van verzending van levende culturen

1. Levende lymfocytenculturen worden ontvangen in T-25-kolven die tot de rand gevuld zijn met RPMI-1640, 15% FCS, 1% Penicilline-Streptomycine (Gibco). De doppen worden strak en verzegeld met parafilm.
2. Parafilm verwijderen.
3. Plaats de culturen in een bevochtigde incubator van 37°C met 5% CO2 in lucht en laat de cellen bezinken (20 – 30 minuten).
4. Verwijder met een steriele pipet alle medium behalve 10-15 ml en gooi dit weg.
5. Plaats de doppen terug op de kolven en maak ze iets losser om gasuitwisseling mogelijk te maken (Controleer of er geen media op de dopdraden zitten. Als dat zo is, kunt u ze overbrengen naar een nieuwe kolf.) Plaats de culturen terug in de incubator met 5% CO 2 in lucht. Ze zouden binnen een dag of twee moeten herstellen.
6. Voed de cellen elke 3-4 dagen met vers medium door de celaggregaten opnieuw te suspenderen en 50-60% van het volume te verwijderen en te vervangen door vers medium. Cellen die uit de kolf zijn verwijderd, kunnen worden gebruikt om indien nodig nieuwe culturen te starten.

Wendy Norris