د PRF حجرو لاینونه غوړول

1. حجرې په چټکۍ سره په 37˚C د اوبو حمام کې وغورځوئ.
2. د شیشې بهر د 70% ایتانول سره پاک کړئ.
3. پړسیدلي حجرې د T25 فلاسک ته انتقال کړئ چې د ودې میډیا 5 ملی لیتره لري.
4. فلاسک د شپې په 37˚C انکیوبیټر کې ځای په ځای کړئ.
5. بله ورځ، د مایکروسکوپ لاندې وګورئ ترڅو ډاډ ترلاسه کړئ چې حجرې تړل شوي دي.
6. رسنۍ لرې کړئ او د تازه ودې میډیا سره ځای په ځای کړئ.

د PRF سیل لینونو فرعي کلتور کول

1. حجرې باید تقسیم شي کله چې یو ځای شي.
2. د حجرو د ویشلو لپاره (د ورکړل شویو حجمونو څخه فرض کیږي چې حجرې په T25 کې دي):
   a) د جراثیم ضد تخنیک په کارولو سره ، میډیا لرې کړئ او فلاسک د 2-3 ملی لیتر جراثیمي HBSS سره وینځئ. HBSS لرې او رد کړئ.
   b) 1 ملی لیتر ټریپسین اضافه کړئ او د 2-3 دقیقو لپاره یې وینځئ. حجرې باید د التهاب مایکروسکوپ لاندې وڅیړل شي ترڅو معلومه کړي چې ایا دوی ګردیدل، پورته کول او تیریدل پیل کړي دي. که حجرې د 3 دقیقو وروسته جلا نه شي، تاسو کولی شئ د 1-2 دقیقو لپاره بل ځای ونیسئ.
   c) کیپ ټینګ کړئ او په نرمۍ سره فلاسک له یوې خوا څخه بلې خوا ته وخورئ ترڅو ټولې حجرې له مینځه ویسي. فلاسک ممکن د اړتیا په صورت کې د حجرو د خلاصولو لپاره په یو اړخ کې په نرمۍ سره ټپ شي.
   d) کله چې حجرې د ټریپسین غیر فعالولو لپاره تیریږي په فلاسک کې 4 ملی لیتر نوي میډیا اضافه کړئ. د فلاسک اړخونه څو ځله د نوي میډیا سره مینځل کړئ ترڅو ټول حجرې له پلاستیک څخه پاک او محلول ته ومینځئ. ټول مایع چې حجرې لري لرې کړئ او د 15 ملی لیتر مخروط (یا 50 ملی لیتر) ته یې انتقال کړئ که تاسو 3 یا ډیر فلاسکونه راټول کړئ.
   e) د جراثیمي تخنیک په کارولو سره، د هیموسایټومیټر د شمیرلو لپاره الیکوټ لرې کړئ.
   f) پداسې حال کې چې تاسو حجرې شمیرئ، پاتې محلول باید په کلینیکي سنټرفیوج کې د 5 دقیقو لپاره په 1000 rpm کې واچول شي.
3. ستاسو د حجرو شمیره محاسبه کولو وروسته، په 2.5 x 10 کې حجرې پلیټ کړئ⁵ حجرې په هر T25 فلټر ټاپ فلاسک کې.
4. حجرې باید په هرو 2-3 ورځو کې د تازه ودې منځني سره تغذیه شي.

یخ کول:

حجرې باید له 5 x 10 څخه کم نه وي منجمد شي⁵ حجرې/ml/cryovial د ودې میډیا کې چې 10% DMSO او 30% FBS لري او وروسته د شپې په -80˚C کې د isopropanol په یخچال کې ځای په ځای شوي. بله ورځ مایع نایټروجن ته انتقال کړئ.

د فرعي کلتور کولو او منجمد فیبروبلاسټونو پروتوکول