Responder: Estudos de PK/PD indicaram biodisponibilidade de 100% no coração, aorta e rim. O rim foi o único tecido onde houve uma sugestão de acúmulo, com base no exame histológico e dados de PK/PD. A administração de dose única de SRP-2001 demonstrou que o PPMO foi rapidamente eliminado do coração (dentro de 2 horas), eliminado da aorta dentro de 4 horas, mas mantido no rim até o ponto de tempo de 48 horas. O ddPCR quantitativo demonstrou atividade de inibição de splicing críptico G608G em todos os tecidos, exceto na pele, testados até agora (aorta, coração, rim, fígado, quadríceps, osso), embora a atividade tenha variado dependendo do tecido.

Francisco, Mike e Wayne

Responder:Em relação à pergunta, para ser honesto, não sei a resposta para essa pergunta. Em um adulto típico, no entanto, não correlacionamos o grau de calcificação valvular com a ingestão de Mg/Ca, a calcificação mais pesada provavelmente se deve a outros fatores.

Dr. Pinak Shah

Responder: Concordo com a opinião do Dr. Shah. Provavelmente as causas da calcificação da válvula em HGPS são diferentes daquelas que vemos em pacientes idosos. Também não tenho conhecimento sobre o metabolismo de Ca e Mg.

Dr. Francesco Musumeci

Responder: O laminado A/C nulo (Lmna^-/-) modelo de camundongo desenvolve DCM acompanhado de perda da função cardíaca. Além disso, esses camundongos apresentam defeitos na condução cardíaca e fibrose cardíaca extensa, e morte prematura em 5-8 semanas de idade (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). No entanto, modelos de camundongos sem apenas Lamin A (Fong et al., 2006) ou lamin C (Coffinier et al., 2010) não apresentam defeitos cardíacos e têm uma expectativa de vida normal.

Referências:
Auguste, G., Gurha, P., Lombardi, R., Coarfa, C., Willerson, JT e Marian, AJ (2018). A supressão de fatores de transcrição FOXO ativados no coração prolonga a sobrevivência em um modelo murino de laminopatias. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). A síntese direta da lâmina A, ignorando o processamento da pré-lâmina a, causa núcleos deformados em fibroblastos, mas nenhuma patologia detectável em camundongos. Revista de Química Biológica, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). A pré-lâmina A e a lâmina A parecem ser dispensáveis na lâmina nuclear. O Jornal de Investigação Clínica, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Expressão específica de cardiomiócitos de lamin A melhora a função cardíaca em camundongos Lmna-/-. PLoS UM, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999). Perda da expressão da lamina tipo A compromete a integridade do envelope nuclear, levando à distrofia muscular. O Jornal de Biologia Celular, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Pergunta: De Tom Misteli: quanto tempo durou o tratamento com lonafarnibe + tozilizumabe em animais?
Responder: Realizamos um experimento preliminar em animais heterozigotos começando na semana 22 até a semana 30. Gostaríamos de nos concentrar neste período para avaliar o efeito no ganho de peso que foi observado anteriormente com tocilizumabe.

Pergunta: De Sgonzalo: Linda história Giovanna e Sammy!!! Vocês viram algum efeito colateral do tratamento com tocilizumabe? Ou algum fenótipo que não foi melhorado em camundongos com progeria? Para a Dra. Giovanna Lattanzi: Pergunta: De tom misteli: quanto tempo durou o tratamento com lonafarnibe + tozilizumabe em animais?
Responder: Obrigado Susana. Não, não vimos nenhum efeito colateral do tocilizumab. Entre os fenótipos examinados (cifose, distrofia do tecido adiposo, defeitos de cabelo e pele, atividade locomotora, lesões da aorta e hipertrofia do miocárdio) foram retardados/melhorados.

Comentário: De MARIE GERHARD-HERMAN: Também usado nos EUA para doenças reumatológicas e vasculite
Responder: Obrigada, Marie, por esta informação interessante sobre o uso para vasculite.

Comentário: Do pc stefano: O tocilizumabe também é aprovado no Japão para tratar a doença de Castleman sem efeitos imunossupressores
Responder: Obrigado Stefano por essas informações.

Pergunta: De Delphine Larrieu: você vê alguma redução nos danos ao DNA após o tratamento com progerinina em células HGPS/modelos de camundongos HGPS?
Responder: Observamos que genes relacionados ao reparo do DNA (BRCA1, Rad51, etc.) foram alterados após o tratamento com progerinina.

Pergunta: De Delphine Larrieu: Como a progerinina funciona em Werner
Síndrome que – até onde eu sei – não expressa progerina? A molécula tem outros alvos?
Responder: As células WS também podem produzir uma pequena quantidade de progerina, como acontece com as células normais envelhecidas.
células. Observamos a expressão de progerina em células WS em níveis de mRNA.
Acreditamos que a proteína WRN pode funcionar para inibir a progerina. No entanto, no
no caso de pacientes com WS, como não há proteína WRN, a expressão de progerina é
pensa-se que ocorre nas décadas de 20 e 30, tanto quanto é visto em pessoas com idade normal
pessoas.

Pergunta: De Bob Bishop: O sítio de ligação da progerinina é definido bioquimicamente ou
estruturalmente? Existe um ensaio bioquímico para encontrar compostos adicionais
com esse mecanismo?
Responder: Realizamos o ensaio de extração de esferas de biotina-avidina e observamos a
interação específica da perogerinina com a progerina, mas não com a lâmina A, lâmina
B, p53 ou emerina.
Também realizamos o ensaio Elisa para encontrar compostos adicionais que pudessem
ser supostos inibidores de ligação de progerina/lamina A. A proteína recombinante de progerina foi incubada sequencialmente com uma biblioteca química e lâmina A.
No entanto, a progerinina foi o produto químico mais eficaz na indústria química
biblioteca.

Pergunta: De John Cooke: Grande progresso Dr. Kim. A progerinina reduz a
secreção de citocinas SASP?
Responder: Observamos que a progerinina pode reduzir a expressão de IL6 e IL8 em
Células HGPS.

Pergunta: De Susan Michaelis: a progerinina está disponível para pesquisadores?
Responder: Claro, está disponível se você solicitar.

Pergunta: De Thomas W Glover: Posso ter perdido, mas o que você acha que é o
mecanismo responsável pelos efeitos benéficos na síndrome de Werner?
Responder: As células derivadas de pacientes com WS também produzem uma pequena quantidade de progerina, como
tanto quanto células normais derivadas de pessoas idosas. A progerinina também pode ser
eficaz em células WS reduzindo a expressão de progerina.

Responder: Obrigado pela pergunta: Não, não é inflamação em si. Parcialmente relacionado à inflamação, estudamos macrófagos neste projeto e descobrimos que o knockout de ICM em aumenta o efluxo de colesterol dos macrófagos, tanto basal quanto estimulado por ApoAI e HDL. Como esse efeito às vezes está associado ao aumento do transporte reverso de colesterol in vivo, gostaríamos de determinar se ICM a inibição reduziria o desenvolvimento da aterosclerose.

Pergunta: De vandres: você tentou a correção de DNA em fibroblastos HGPS humanos de diferentes idades (in vitro) e testou a normalização do fenótipo deles para ver se ele diminui à medida que as células envelhecem?
Responder: Não, não tentamos correção em fibroblastos de pacientes de diferentes idades — apenas de dois pacientes diferentes, que produziram resultados semelhantes.

Pergunta: De Delphine Larrieu: Efeitos incríveis! Você esperaria um KO completo de progerina em camundongos heterozigotos?
Responder: No camundongo de cópia única, eu não esperaria necessariamente eficiências de edição muito diferentes do que observamos atualmente, uma vez que já deveria haver um excesso de agente de edição para cada progerina.

Pergunta: De André Monteiro Da Rocha: Você acha que a reprogramação de uma baixa porcentagem de células pode reparar a função das células-tronco, mas pode levar à exaustão das células-tronco adultas?
Responder: Não temos dados que possam informar uma resposta para esta pergunta.

Pergunta: De Mei: Parece cardiomiócito, coloração linda!
De Abby Buchwalter: A expressão dominante negativa de Sun1 interrompe todos os complexos LINC, incluindo aqueles mediados por Sun2?
Responder: Sim, há evidências disso in vitro, pois todos os Nesprins no NE podem ser deslocados pelo DNSUN1

Pergunta: De Suet Nee Chen: como e qual é o mecanismo pelo qual o AAV9-SunDn é capaz de ter efeitos de longo prazo? Em que idade você injetou o AAV9-Sun1DN nos camundongos mutantes LMNA?
Responder: Injetamos o DNSUN1 AAV um dia após induzir a Cre recombinase para deletar a laminA. Temos dados de que o DNSUN1 entregue pelo AAV continua a ser expresso nos cardiomiócitos um ano após a injeção. Estamos fazendo experimentos de dose/tempo/resposta agora que estamos de volta ao laboratório e podemos fazer nosso próprio AAV em quantidades suficientes

Pergunta: De Martin Bergö, Viceordförande Kommittén för forskning: Qual você acha que é a contribuição relativa da lâmina A ausente versus a lâmina C em seus experimentos de eliminação de Lmna?
Responder: Não tenho certeza sobre isso, mas Sun1 interage com LaminA e nos camundongos HGPS a contribuição deve ser toda LaminA (da qual a progerina é derivada)

Pergunta: De jcampisi: Qual é a causa da morte em SUN1 KO ou hets?
Responder: Boa pergunta, ainda não sabemos, mas atualmente suspeitamos de algum grupo de músculos esqueléticos. Precisamos fazer uma análise histopatológica decente dos ratos moribundos.

Pergunta: De Tom Misteli: Colin: você viu mudanças nas vias de resposta ao estresse celular nos animais Lmna/Sun?
Responder: Ainda não medimos nenhum gene/marcador de resposta ao estresse nesses camundongos

Pergunta: De Delphine Larrieu: Você consideraria atingir apenas o coração com o DNSUN1 em pacientes com HGPS?
Responder: Isso é possível dado o sorotipo e o uso de um promotor específico de cardiomiócitos. Esses experimentos estão atualmente em andamento

Pergunta:De Yuexia Wang: Por que KO SUN1 tem menos benefícios em camundongos homozigotos G609G?
Responder: Presumivelmente porque os camundongos homozigotos estão expressando mais Progerina. Vemos um efeito de resposta de heterozigotos x homozigotos em nossos experimentos genéticos

Pergunta:De Roland Foisner: Olá Colin, boa conversa. Qual é o efeito negativo do SUN1 regulado positivamente no HGPS. Roland
Responder: Provavelmente aumento da associação da rede MT com o complexo LINC. Aumento da expressão de Sun/Nesprin em células de cultura afeta o posicionamento nuclear e a migração celular

Uma honra conhecer a família Basso e Peraut. Obrigado por compartilhar sua jornada. Vocês são verdadeiramente uma inspiração!

Obrigada à família de Sami e Alexandra por participarem do workshop e compartilharem sua jornada inspiradora com a progéria!

Progresso fantástico Eiger com aprovação no horizonte.

Podemos estender esta sessão até o final da semana e continuar a discussão? (OBRIGADO a todos!) 

Este workshop foi incrível. Parabenizo a PRF por ter o comprometimento de fazer esta grande atividade. Sem dúvidas, este workshop me encheu de muito conhecimento para o meu futuro. Foi incrível. Juntos encontraremos a cura!

Sempre impressionado com a ciência emocionante nas reuniões do PRF. Muitos elogios aos organizadores por preservar a experiência do workshop comunitário, mesmo neste formato virtual!

Vocês todos ARRASAM!!! Obrigado por esta grande oportunidade, pensando em muitos anos atrás, agora é como viver no futuro! Feliz por fazer parte disso

Sinto falta da guitarra do Dr. Collin. Ótimo trabalho!

Muito obrigado por organizar isso, realmente o destaque da minha semana!

Obrigado a todos e nos vemos pessoalmente no ano que vem em Cambridge!!

 Obrigado a todos por se juntarem a nós!