PRF செல் கோடுகளைக் கரைத்தல்

1. 37˚C நீர் குளியலில் செல்களை வேகமாக கரைக்கவும்.
2. குப்பியின் வெளிப்புறத்தை 70% எத்தனால் கொண்டு துடைக்கவும்.
3. கரைந்த செல்களை 5 மில்லி வளர்ச்சி ஊடகம் கொண்ட T25 குடுவைக்கு மாற்றவும்.
4. ஒரே இரவில் 37˚C இன்குபேட்டரில் குடுவை வைக்கவும்.
5. அடுத்த நாள், செல்கள் இணைக்கப்பட்டுள்ளதை உறுதிப்படுத்த நுண்ணோக்கின் கீழ் கண்காணிக்கவும்.
6. மீடியாவை அகற்றி, புதிய வளர்ச்சி ஊடகத்துடன் மாற்றவும்.

துணை கலாச்சாரம் PRF செல் கோடுகள்

1. கலங்கள் சங்கமிக்கும் போது பிரிக்கப்பட வேண்டும்.
2. செல்களைப் பிரிக்க (தொகுதிகள் T25 இல் செல்கள் இருப்பதாகக் கருதுகிறது):
   a) மலட்டு நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி, மீடியாவை அகற்றி, 2-3 மில்லி மலட்டு HBSS கொண்டு குடுவையை துவைக்கவும். HBSS ஐ அகற்றி நிராகரிக்கவும்.
   b) 1 மில்லி டிரிப்சின் சேர்த்து 2-3 நிமிடங்கள் அடைகாக்கவும். செல்கள் சுற்றவும், உயர்த்தவும் மற்றும் மிதக்கவும் தொடங்கியுள்ளனவா என்பதை அறிய, தலைகீழ் நுண்ணோக்கியின் கீழ் சரிபார்க்கப்பட வேண்டும். 3 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு செல்கள் பிரிக்கப்படாவிட்டால், நீங்கள் மற்றொரு 1-2 நிமிடங்களுக்கு அடைகாக்கலாம்.
   c) தொப்பியை இறுக்கி, அனைத்து செல்களையும் அகற்ற, பக்கவாட்டில் இருந்து பிளாஸ்க்கை மெதுவாகத் திருப்பவும். தேவைப்பட்டால், செல்களை தளர்த்துவதற்கு, குடுவையை பக்கத்தில் லேசாகத் தட்டலாம்.
   ஈ) டிரிப்சின் செயலிழக்க செல்கள் மிதந்தவுடன் 4 மில்லி புதிய மீடியாவை குடுவையில் சேர்க்கவும். பிளாஸ்டிக் மற்றும் கரைசலில் அனைத்து செல்களையும் கழுவ புதிய மீடியாவுடன் பிளாஸ்கின் பக்கங்களை பல முறை துவைக்கவும். செல்களைக் கொண்ட அனைத்து திரவத்தையும் அகற்றி, 15 மிலி கூம்பு வடிவத்திற்கு மாற்றவும் (அல்லது நீங்கள் 3 அல்லது அதற்கு மேற்பட்ட குடுவைகளை சேகரித்தால் 50 மில்லி).
   e) மலட்டு நுட்பத்தைப் பயன்படுத்தி, ஹீமோசைட்டோமீட்டரில் எண்ணுவதற்கு ஒரு அலிகோட்டை அகற்றவும்.
   f) நீங்கள் செல்களை எண்ணும் போது, மீதமுள்ள கரைசலை 1000 ஆர்பிஎம்மில் 5 நிமிடங்களுக்கு மருத்துவ மையவிலக்கில் சுழற்ற வேண்டும்.
3. உங்கள் செல் எண்ணிக்கையைக் கணக்கிட்ட பிறகு, தட்டு செல்கள் 2.5 x 10⁵ T25 வடிகட்டி மேல் குடுவைக்கு செல்கள்.
4. ஒவ்வொரு 2-3 நாட்களுக்கும் புதிய வளர்ச்சி ஊடகத்துடன் செல்களுக்கு உணவளிக்க வேண்டும்.

உறைதல்:

செல்கள் 5 x 10க்குக் குறையாமல் உறைந்திருக்க வேண்டும்⁵ 10% DMSO மற்றும் 30% FBS கொண்ட வளர்ச்சி ஊடகத்தில் செல்கள்/ml/cryovial மற்றும் பின்னர் ஐசோப்ரோபனோல் உறைபனி அறையில் ஒரே இரவில் -80˚C இல் வைக்கப்பட்டது. அடுத்த நாள் திரவ நைட்ரஜனுக்கு மாற்றவும்.

துணை கலாச்சாரம் மற்றும் உறைதல் ஃபைப்ரோபிளாஸ்ட்களுக்கான நெறிமுறை