லிம்போபிளாஸ்ட்களை வளர்ப்பதற்கான நெறிமுறை

வளர்ச்சி ஊடகம்

RPMI 1640 – தெர்மோஃபிஷர் # 11875
15% ஃபெடல் போவின் சீரம் (FBS) – தெர்மோஃபிஷர் #10437-028
1% (1X) பென்சிலின்-ஸ்ட்ரெப்டோமைசின் (விரும்பினால்) – தெர்மோஃபிஷர் #15140-122

பொது குறிப்புகள்

• வளர்ச்சி ஊடகம் எப்போதும் இன்குபேட்டரில் 37°C, 5% CO இல் சமநிலைப்படுத்தப்பட வேண்டும்.₂ பயன்படுத்துவதற்கு 30 நிமிடங்களுக்கு முன்
• எப்போதும் காற்றோட்டமான மூடிகள் கொண்ட பிளாஸ்குகளைப் பயன்படுத்துங்கள்.
• எப்போதும் குடுவையை நிமிர்ந்த நிலையில் வைக்கவும்.
• ஒரு T25 பிளாஸ்கில் 20 மில்லிக்கு மேல் பயன்படுத்தக்கூடாது.

உறைந்த செல்களை உருக்குதல்

உறைந்த செல்கள் உலர் பனிக்கட்டியில் 1 மில்லி அலிகோட்களில் பெறப்படும். செல் வளர்ப்பிற்காக செல்களை உருகும் வரை உறைந்த நிலையில் வைக்கவும் அல்லது உடனடியாக கலாச்சாரங்களைத் தொடங்கவில்லை என்றால் திரவ நைட்ரஜன் சேமிப்பகத்தில் வைக்கவும். இருப்பினும், நீங்கள் பின்னர் பயன்படுத்த செல்களைச் சேமிக்கப் போகிறீர்கள் என்றால், புதிய பங்குகளை வளர்த்து, பல ஆம்பூல்களை உறைய வைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. செல்கள் 45% RPMI-1640, 50% FBS மற்றும் 5% DMSO (திசு வளர்ப்பு தரம்) ஆகியவற்றில் கிரையோபிரேசர்வ் செய்யப்படுகின்றன.

1. 1. காற்றோட்டமான மூடியுடன் கூடிய T-25 பிளாஸ்கில் 10 மில்லி RPMI-1640, 15% கரு போவின் சீரம் (FBS), ± நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகளை வைக்கவும்.
   2. 5% CO உடன் 37°C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் ஊடகத்தை சமநிலைப்படுத்த அனுமதிக்கவும்.₂ 30 நிமிடங்கள் காற்றில் வைக்கவும். குடுவைகளை நிமிர்ந்த நிலையில் அடைகாக்க வேண்டும்.
   3. உறைந்த செல்களின் ஒவ்வொரு ஆம்பூலையோ அல்லது குப்பியையோ 37°C நீர் குளியல் அல்லது ஒரு பீக்கர் வெதுவெதுப்பான நீரில் ஒவ்வொன்றாகக் கரைக்கவும்.
   4. 70% எத்தனால் கொண்டு ஆம்பூல் அல்லது குப்பியின் வெளிப்புறத்தை விரைவாக சுத்தம் செய்யவும். செல்கள் ஒரு கண்ணாடி ஆம்பூலில் இருந்தால், உடைந்த கண்ணாடியிலிருந்து விரல்களைப் பாதுகாக்க ஆம்பூலை கவனமாக உடைக்கவும்.
   5. 1 மில்லி உறைந்த செல்களை ஒரு மலட்டு பைப்பட் மூலம் அகற்றி, 10 மில்லி மீடியம் கொண்ட T-25 பிளாஸ்கில் வைக்கவும். ஒவ்வொரு செல் கோட்டையும் அடையாளம் காண பிளாஸ்கில் தெளிவாக லேபிளிடவும்.
   6. 5% CO2 உடன் 37°C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் பிளாஸ்கை வைக்கவும்.₂ காற்றில். குடுவைகளை நிமிர்ந்த நிலையில் அடைகாக்க வேண்டும்.
   7. 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு, பிளாஸ்கின் அடிப்பகுதியில் குடியேறிய லிம்போசைட்டுகளைத் தொந்தரவு செய்யாத வகையில் மேலிருந்து 5 மில்லி மீடியத்தை அகற்றி, முன் சூடாக்கப்பட்ட 5 மில்லி மீடியத்துடன் மாற்றவும்.
   8. லிம்போபிளாஸ்ட் செல் வளர்ப்பு நெறிமுறையுடன் தொடரவும்.

லிம்போபிளாஸ்ட் கலாச்சாரம்

1. 1. உருகிய மூன்று முதல் நான்கு நாட்களுக்குப் பிறகு, செல்களை எண்ணுங்கள். செல்கள் ஒட்டாமல் இருக்கும், கொத்தாக வளரும். மென்மையான குழாய் பதித்தல் மூலம் கொத்தாக உடைக்கவும்.
   2. செல்களை எண்ணுங்கள்.
   3. வெறுமனே, செல் செறிவு 2 x 10 ஐ விட அதிகமாக இருக்கக்கூடாது.⁶ செல்கள்/மி.லி.
   4. செல் செறிவைப் பொறுத்து செல்களை மீண்டும் ஊட்டவும், பிரிக்கவும் அல்லது உறைய வைக்கவும்.
   5. 5-6 மில்லி சமப்படுத்தப்பட்ட வளர்ச்சி ஊடகத்தைச் சேர்த்து மீண்டும் உணவளிக்கவும்.
   6. 2 x 10 க்கும் குறையாமல் புதிய பயிர்களை விதைக்கவும்.⁵ செல்கள்/மி.லி.
   7. செல்கள் தோராயமாக 5 x 10 இல் உறைய வைக்கப்பட வேண்டும்.⁶ செல்கள்/மிலி. செல் உறைதல் நெறிமுறையைப் பின்பற்றவும்.

உறைபனி லிம்போபிளாஸ்ட்கள்

1. 1. செல்கள் தோராயமாக 5 x 10 இல் உறைய வைக்கப்பட வேண்டும்.⁶ செல்கள்/மி.லி.
   2. 15 அல்லது 50 மில்லி கூம்பு வடிவக் குழாயில் பொருத்தமான அளவிலான செல்களை மாற்றவும்.
   3. 100 xg இல் 4°C இல் சென்ட்ரிஃபியூஜை 10 நிமிடங்களுக்கு வைக்கவும்.
   4. மீடியத்தை அகற்றி, பொருத்தமான அளவு குளிர் உறைபனி மீடியத்தில் மீண்டும் வைக்கவும்.
   5. ஒவ்வொன்றும் 1 மில்லி செல்களை கிரையோவியலுக்கு மாற்றவும்.
   6. கிரையோவியல்களை உறைவிப்பான் அறையில் வைக்கவும், இரவு முழுவதும் -80°C வெப்பநிலையில் உறைவிப்பான் பெட்டியில் வைக்கவும்.
   7. மறுநாள் கிரையோவியல்களை திரவ நைட்ரஜனுக்கு மாற்றவும்.

வெண்டி நோரிஸ்