உறைந்த கலங்களின் ஏற்றுமதியிலிருந்து

உறைந்த செல்கள் உலர்ந்த பனியில் 1 மில்லி அலிகோட்களில் பெறப்படும். உயிரணு வளர்ப்பிற்காக செல்களை உறைய வைக்கும் வரை அல்லது திரவ நைட்ரஜன் சேமிப்பகத்தில் வைக்கவும். இருப்பினும், நீங்கள் பின்னர் பயன்படுத்த செல்களை சேமிக்கப் போகிறீர்கள் என்றால், புதிய பங்குகளை வளர்த்து, பல ஆம்பூல்களை உறைய வைக்க பரிந்துரைக்கப்படுகிறது. செல்கள் 45% RPMI-1640, 50% கரு கன்று சீரம் மற்றும் 5% DMSO (திசு வளர்ப்பு தரம்) ஆகியவற்றில் கிரையோப்ரெசர்வ் செய்யப்பட்டுள்ளன.

1. 10 மில்லி RPMI-1640, 15% கரு கன்று சீரம் (FCS), ± நுண்ணுயிர் எதிர்ப்பிகளை T-25 குடுவையில் வைக்கவும்.
2. 30 நிமிடங்களுக்கு 5% CO2 காற்றில் உள்ள 37°C ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் மீடியாவை சமநிலைப்படுத்த அனுமதிக்கவும்.
3. உறைந்த செல்களின் ஒவ்வொரு ஆம்பூலையும் 37 டிகிரி செல்சியஸ் நீர் குளியல் அல்லது வெதுவெதுப்பான நீரின் பீக்கரில் ஒவ்வொன்றாக கரைக்கவும்.
4. ஒரு மலட்டுத்தன்மையற்ற ஐசோப்ரோபனோல் ப்ரெப் பேட் மூலம் ஆம்பூலின் வெளிப்புறத்தை விரைவாக சுத்தம் செய்யவும், பின்னர் விரல்களைப் பாதுகாக்க ஆம்பூலைச் சுற்றி ப்ரெப் பேடைச் சுற்றி, உயிரியல் பாதுகாப்பு பேட்டைக்குள் ஆம்பூலில் உள்ள முத்திரையை உடைக்கவும்.
5. 1 மில்லி உறைந்த செல்களை ஒரு மலட்டு கண்ணாடி பாஸ்டர் குழாய் மூலம் அகற்றி, 10 மில்லி மீடியம் கொண்ட T-25 குடுவையில் வைக்கவும். ஒவ்வொரு செல் கோட்டையும் அடையாளம் காண, குடுவையை தெளிவாக லேபிளிடுங்கள்.
6. காற்றில் 5% CO2 உடன் 37°C ஈரப்பதம் கொண்ட இன்குபேட்டரில் செல்களை வைக்கவும்.
7. 24 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு, குடுவையின் அடிப்பகுதியில் உள்ள லிம்போசைட்டுகளுக்கு இடையூறு விளைவிக்காமல் மேலே இருந்து 5 மில்லி மீடியத்தை அகற்றி, அதற்குப் பதிலாக 5 மி.லி.
8. ஒவ்வொரு 3 - 4 நாட்களுக்கும் 5 - 6 மில்லி புதிய ஊடகத்துடன் செல்களுக்கு உணவளிக்கவும் மற்றும் தேவைக்கேற்ப புதிய கலாச்சாரங்களாக பிரிக்கவும்.

நேரடி கலாச்சாரங்களின் ஏற்றுமதியிலிருந்து

1. RPMI-1640, 15% FCS, 1% பென்சிலின்-ஸ்ட்ரெப்டோமைசின் (கிப்கோ) ஆகியவற்றுடன் மேலே நிரப்பப்பட்ட T-25 பிளாஸ்க்களில் நேரடி லிம்போசைட் கலாச்சாரங்கள் பெறப்படும். தொப்பிகள் இறுக்கமாக மற்றும் பாராஃபில்ம் மூலம் மூடப்பட்டிருக்கும்.
2. பாராஃபில்மை அகற்று.
3. காற்றில் 5% CO2 உடன் 37 டிகிரி செல்சியஸ் ஈரப்பதமான இன்குபேட்டரில் கலாச்சாரங்களை வைக்கவும் மற்றும் செல்கள் வெளியேற அனுமதிக்கவும் (20 - 30 நிமிடங்கள்).
4. ஒரு மலட்டு குழாய் பயன்படுத்தி 10 - 15 மிலி மீடியம் தவிர மற்ற அனைத்தையும் அகற்றவும் மற்றும் நிராகரிக்கவும்.
5. வாயு பரிமாற்றத்தை அனுமதிக்க, சிறிது தளர்த்தப்பட்ட பிளாஸ்க்களில் தொப்பிகளை மீண்டும் வைக்கவும் (தொப்பி நூல்களில் மீடியா இல்லை என்பதை சரிபார்க்கவும். அப்படியானால், நீங்கள் ஒரு புதிய பிளாஸ்கிற்கு மாற்ற விரும்பலாம்.) 5% CO 2in காற்றுடன் கலாச்சாரங்களை மீண்டும் இன்குபேட்டரில் வைக்கவும். . ஓரிரு நாட்களில் அவர்கள் குணமடைய வேண்டும்.
6. ஒவ்வொரு 3 - 4 நாட்களுக்கு ஒருமுறை புதிய மீடியம் மூலம் செல்களை ஊட்டவும். குடுவையிலிருந்து அகற்றப்பட்ட செல்கள் தேவைக்கேற்ப புதிய கலாச்சாரங்களைத் தொடங்கப் பயன்படும்.

வெண்டி நோரிஸ்