відповідь: ФК/ФД дослідження показали біодоступність 100% у серці, аорті та нирках. Нирки були єдиною тканиною, де існувало припущення про накопичення на основі гістологічного дослідження та даних ФК/ФД. Введення одноразової дози SRP-2001 показало, що PPMO швидко виводився із серця (протягом 2 годин), виводився з аорти протягом 4 годин, але зберігався в нирках до 48 годин. Кількісна ddPCR продемонструвала активність інгібування таємного сплайсингу G608G у всіх тканинах, окрім шкіри, перевірених на даний момент (аорта, серце, нирки, печінка, квадрицепси, кістки), хоча активність змінювалася залежно від тканини.

Френсіс, Майк і Вейн

відповідь:Щодо питання, чесно кажучи, я не знаю відповіді на це питання. Однак у типової дорослої людини ми не співвідносимо ступінь кальцифікації клапанів із споживанням магнію/кальцію, сильніша кальцифікація, ймовірно, пов’язана з іншими факторами.

Доктор Пінак Шах

відповідь: Я згоден з думкою доктора Шаха. Ймовірно, причини кальцифікації клапана при HGPS відрізняються від тієї, яку ми спостерігаємо у літніх пацієнтів. Я також не знаю про обмін Ca та Mg.

Доктор Франческо Мусумечі

відповідь: Ламін A/C нуль (Lmna^-/-) мишача модель розвиває DCM, що супроводжується втратою серцевої функції. Крім того, у цих мишей спостерігаються дефекти серцевої провідності та великий серцевий фіброз, а також передчасна смерть у віці 5-8 тижнів (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999). Однак мишачі моделі, у яких відсутній лише ламін A (Fong та ін., 2006) або ламін С (Coffinier та ін., 2010), не виявляють серцевих дефектів і мають нормальну тривалість життя.

Література:
Огюст Г., Гурха П., Ломбарді Р., Коарфа К., Віллерсон Дж. Т. та Маріан А. Дж. (2018). Придушення активованих факторів транскрипції FOXO в серці подовжує виживання в мишачій моделі ламінопатій. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Коффіньє, К., Юнг, Х.Дж., Лі, З., Нобуморі, К., Юн, У.Дж., Фарбер, Е.А., Девіс, Б.С., Вайнштейн, М.М., Янг, С.Х., Ламмердінг, Дж., Фарахані, Дж.Н., Бентоліла, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). Прямий синтез ламіну А, минаючи обробку преламіну А, викликає деформацію ядер у фібробластах, але не виявляє патології у мишей. Журнал біологічної хімії, 285(27), 20818–20826. https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Фонг, Л.Г., Берго, МО, Янг, С.Г., Фонг, Л.Г., Нг, Дж.К., Ламмердінг, Дж., Вікерс, ТА, Мета, М., Коте, Н., Гавіно, Б., Цяо, X., Чанг , SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Преламін А та ламін А, як видається, відсутні в ядерній пластинці. Журнал клінічних досліджень, 116(3), 743–752. https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Фрок, Р.Л., Чен, С.К., Да, Д., Фретт, Е., Лау, К., Браун, К., Пак, Д.Н., Ванг, Ю., Мучір, А., Ворман, Х.Дж., Сантана, Л.Ф., Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012). Специфічна для кардіоміоцитів експресія ламіну А покращує серцеву функцію у мишей Lmna-/-. PLoS ОДИН, 7(8), 1–9. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Салліван, Т. (1999). Втрата експресії ламіну А-типу порушує цілісність ядерної оболонки, що призводить до м’язової дистрофії. Журнал клітинної біології, 147(5), 913–920. https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

Питання: Від Тома Містелі: скільки тривало лікування тварин лонафарнібом + тозилізумаб?
відповідь: Ми провели попередній експеримент на гетерозиготних тваринах, починаючи з 22-го до 30-го тижня. Ми хочемо зосередитися на цьому часовому проміжку, щоб оцінити вплив на збільшення ваги, який раніше спостерігався при застосуванні тоцилізумабу.

Питання: Від Сгонцало: Красива історія Джованни та Семмі!!! Чи спостерігали ви побічні ефекти лікування тоцилізумабом? Або будь-які фенотипи, які не були покращені у прогерійних мишей? Доктору Джованні Латтанці: Запитання: від Тома Містелі: скільки тривало лікування тварин лонафарнібом + тозилізумаб?
відповідь: Дякую Сусано. Ні, ми не спостерігали побічної дії тоцилізумабу. Серед обстежених фенотипів (кіфоз, дистрофія жирової тканини, дефекти волосся та шкіри, рухової активності, ураження аорти та гіпертрофія міокарда) сповільнено/поліпшено.

коментар: Від MARIE GERHARD-HERMAN: також використовується в США для лікування ревматологічних захворювань і васкулітів
Відповідь: Дякую, Маріє, за цю цікаву інформацію щодо застосування при васкуліті.

коментар: Від pc stefano: Тоцилізумаб також схвалений в Японії для лікування хвороби Каслмана без імуносупресивних ефектів
Відповідь: Дякую Стефано за цю інформацію.

Питання: Від Delphine Larrieu: чи бачите ви, що будь-яке пошкодження ДНК зменшується після лікування прогерином у клітинах HGPS/моделях мишей HGPS?
відповідь: Ми спостерігали, що гени, пов’язані з відновленням ДНК (BRCA1, Rad51 тощо), були змінені після лікування прогерином.

Питання: Від Delphine Larrieu: Як прогерін працює у Вернера
Синдром, який – наскільки я знаю – не експресує прогерин? Чи має молекула інші цілі?
відповідь: Клітини WS також можуть виробляти невелику кількість прогерину, як у нормальному віці
клітини. Ми спостерігали експресію прогерину в клітинах WS на рівнях мРНК.
Ми вважаємо, що білок WRN може функціонувати для інгібування прогерину. Проте в
У випадку пацієнтів з WS, оскільки немає білка WRN, існує експресія прогерину
вважається, що це відбувається у 20-30-х роках, так само, як це спостерігається в нормальному віці
людей.

Питання: Від Боба Бішопа: місце зв’язування прогерину визначається біохімічним шляхом або
структурно? Чи існує біохімічний аналіз для пошуку додаткових сполук
з цим механізмом?
відповідь: Ми провели аналіз кульок біотин-авідин і спостерігали
специфічна взаємодія перогеніну з прогерином, але не з ламіном А, ламін
B, p53 або емерин.
Ми також провели аналіз Elisa, щоб знайти додаткові сполуки, які могли б
бути передбачуваними інгібіторами зв'язування прогерину/ламіну А. Рекомбінантний білок прогерину інкубували послідовно з хімічною бібліотекою та ламіном А.
Проте прогерін був найефективнішою хімічною речовиною в хімічній речовині
бібліотека.

Питання: Від Джона Кука: великий прогрес, доктор Кім. Чи знижує прогеринін
секреції цитокінів SASP?
відповідь: Ми спостерігали, що прогерін може знижувати експресію IL6 та IL8 у
клітини HGPS.

Питання: Від Сьюзен Міхаеліс: чи доступний дослідникам прогерінін?
відповідь: Звичайно, це доступно за вашим запитом.

Питання: Від Томаса Гловера: можливо, я пропустив це, але що, на вашу думку, це
механізм, відповідальний за сприятливі ефекти при синдромі Вернера?
відповідь: Клітини пацієнтів WS також виробляють невелику кількість прогерину, як
так само, як і нормальні клітини, отримані від літніх людей. Прогеринін також може бути
ефективний у клітинах WS шляхом зниження експресії прогерину.

відповідь: Дякую за запитання: ні, це не запалення як таке. Частково пов’язані із запаленням, ми вивчали макрофаги в цьому проекті та виявили, що нокаут Icmt збільшує відтік холестерину з макрофагів, як базальний, так і стимульований ApoAI і HDL. Оскільки цей ефект інколи пов’язаний із збільшенням зворотного транспорту холестерину in vivo, ми хотіли б визначити, чи є це Icmt інгібування зменшить розвиток атеросклерозу.

Питання: Від vandres: чи пробували ви корекцію ДНК у фібробластах HGPS людини різного віку (in vitro) і перевіряли нормалізацію їхнього фенотипу, щоб побачити, чи зменшується він у міру старіння клітин?
відповідь: Ні, ми не пробували корекцію фібробластів у пацієнтів різного віку — лише у двох різних пацієнтів, що дало схожі результати.

Питання: Від Delphine Larrieu: Дивовижні ефекти! Чи очікуєте ви повного прогерину KO у гетерозиготних мишей?
відповідь: У миші з єдиною копією я не обов’язково очікував би набагато іншої ефективності редагування, ніж те, що ми спостерігаємо зараз, оскільки для кожного прогерина вже має бути надлишок агента редагування.

Питання: Від Андре Монтейру Да Роша: Чи вважаєте ви, що перепрограмування низького відсотка клітин може відновити функцію стовбурових клітин, але може призвести до виснаження стовбурових клітин дорослої людини?
відповідь: Ми не маємо жодних даних, які могли б дати відповідь на це питання.

Питання: Від Mei: Схоже на кардіоміоцит, гарне фарбування!
Від Еббі Бухвальтер: чи порушує домінантна негативна експресія Sun1 усі комплекси LINC, включно з тими, що опосередковуються Sun2?
відповідь: Так, є докази цього in vitro, оскільки всі Nesprin у NE можуть бути витіснені DNSUN1

Питання: Від Suet Nee Chen: як і який механізм, за допомогою якого AAV9-SunDn може мати довгострокові наслідки? У якому віці ви вводили AAV9-Sun1DN мишам-мутантам LMNA?
відповідь: Ми ввели DNSUN1 AAV через день після індукції рекомбінази Cre для видалення laminA. У нас є дані про те, що DNSUN1, доставлений AAV, продовжує експресуватися в кардіоміоцитах через рік після ін’єкції. Тепер, коли ми повернулися в лабораторію і можемо виробляти власний AAV у достатніх кількостях, ми проводимо експерименти з дозами/часами/відповіддю

Питання: Від Мартіна Берго, віце-президента Комітету з форскнінгу: Як ви думаєте, який відносний внесок відсутнього ламіна А проти ламіна С у ваших експериментах з нокаутом Lmna?
відповідь: Я не впевнений щодо цього, але Sun1 взаємодіє з LaminA, і в мишей HGPS внесок повинен бути повністю LaminA (з якого походить прогерин)

Питання: Від jcampisi: яка причина смерті SUN1 KO або hets?
відповідь: Гарне запитання, ми все ще не знаємо, але наразі підозрюємо певну групу скелетних м’язів. Нам потрібен якісний гістопатологічний аналіз вмираючих мишей

Питання: Від Тома Містелі: Колін: чи бачили ви зміни в клітинних шляхах реакції на стрес у тварин Lmna/Sun?
відповідь: Ми ще не вимірювали жодних генів/маркерів реакції на стрес у цих мишей

Запитання: Від Delphine Larrieu: Чи плануєте ви націлювати DNSUN1 лише на серце у пацієнтів з HGPS?
відповідь: Це можливо, враховуючи серотип і використання кардіоміоцит-специфічного промотора. Зараз ці експерименти тривають

Питання:Від Yuexia Wang: Чому KO SUN1 має меншу користь від гомозиготних мишей G609G?
відповідь: Імовірно тому, що гомозиготні миші експресують більше прогерину. У наших генетичних експериментах ми бачимо ефект реакції гетерозигот проти гомозигот

Питання:Від Роланда Фойзнера: Привіт, Колін, гарна розмова. Який негативний вплив посиленого SUN1 на HGPS. Роланд
відповідь: Ймовірно підвищена асоціація мережі МТ з комплексом ЛІНК. Підвищена експресія Sun/Nesprin у клітинах культури впливає на позиціонування ядер і міграцію клітин

Для мене честь познайомитися з родиною Бассо та Перо. Дякуємо, що поділилися своєю подорожжю. Ви справді і натхнення!

Дякуємо родині Самі та Олександри за те, що ви взяли участь у семінарі та поділилися своєю натхненною подорожжю з прогерією!

Фантастичний прогрес Ейгера зі схваленням на горизонті.

Чи можемо ми продовжити цю сесію до кінця тижня і продовжити обговорення? (СПАСИБІ ВАМ, усім!) 

Цей семінар був неймовірним. Я вітаю PRF за взяті на себе зобов’язання здійснити цю чудову діяльність. Без сумніву, цей семінар наповнив мене багатьма знаннями для майбутнього. Це було неймовірно. Разом ми знайдемо ліки!

Завжди під враженням від захоплюючої науки на засіданнях PRF. Велика подяка організаторам за збереження досвіду семінару спільноти навіть у цьому віртуальному форматі!

Ви всі РОК!!! Дякую за цю чудову можливість, думаючи про багато років тому, зараз це ніби жити в майбутньому! Щасливий бути частиною цього

Я сумую за гітарою доктора Колліна. Чудова робота!

Щиро дякую за організацію цього справді найголовнішого моменту мого тижня!

Дякуємо всім і зустрінемось особисто наступного року в Кембриджі!!

 Дякуємо всім, що приєдналися до нас!