回答： PK/PD 研究表明 100% 在心脏、主动脉和肾脏中的生物利用度较高。根据组织学检查和 PK/PD 数据，肾脏是唯一有蓄积迹象的组织。单剂量 SRP-2001 给药表明 PPMO 迅速从心脏中清除（2 小时内），从主动脉中清除（4 小时内），但在肾脏中持续到 48 小时时间点。定量 ddPCR 表明，迄今为止除皮肤外，所有测试的组织（主动脉、心脏、肾脏、肝脏、股四头肌、骨骼）中均存在 G608G 隐蔽剪接抑制活性，尽管活性因组织而异。

弗朗西斯、迈克和韦恩

回答：关于这个问题，说实话，我不知道答案。然而，对于典型的成年人来说，我们并没有将瓣膜钙化的程度与镁/钙摄入量联系起来，更严重的钙化可能是由其他因素造成的。

皮纳克·沙阿博士

回答： 我同意 Shah 博士的观点。HGPS 中瓣膜钙化的原因可能与我们在老年患者中看到的原因不同。我对钙和镁代谢也不了解。

Francesco Musumeci 博士

回答： 层蛋白 A/C 无效 (林纳^-/-) 小鼠模型会发展为伴有心脏功能丧失的 DCM。此外，这些小鼠表现出心脏传导缺陷和广泛的心脏纤维化，并在 5-8 周龄时过早死亡 (Auguste et al., 2018; Frock et al., 2012; Sullivan, 1999)。然而，仅缺乏层蛋白 A (Fong et al., 2006) 或层蛋白 C (Coffinier et al., 2010) 的小鼠模型不会出现心脏缺陷，并且具有正常的寿命。

参考：
Auguste, G.、Gurha, P.、Lombardi, R.、Coarfa, C.、Willerson, JT 和 Marian, AJ (2018)。 抑制心脏中激活的 FOXO 转录因子可延长核纤层蛋白病小鼠模型的生存期. https://doi.org/10.1161/CIRCRESAHA.117.312052

Coffinier, C., Jung, HJ, Li, Z., Nobumori, C., Yun, UJ, Farber, EA, Davies, BS, Weinstein, MM, Yang, SH, Lammerding, J., Farahani, JN, Bentolila, LA, Fong, LG, & Young, SG (2010). 绕过前层蛋白 a 加工，直接合成层蛋白 A，导致成纤维细胞中的细胞核畸形，但在小鼠中未检测到病理。 生物化学杂志, 285(27), 20818–20826。 https://doi.org/10.1074/jbc.M110.128835

Fong, LG, Bergo, MO, Young, SG, Fong, LG, Ng, JK, Lammerding, J., Vickers, TA, Meta, M., Coté, N., Gavino, B., Qiao, X., Chang, SY, Young, SR, Yang, SH, Stewart, CL, Lee, RT, Bennett, CF, Bergo, MO, & Young, SG (2006). Prelamin A 和层蛋白 A 似乎在核层中是可有可无的。 临床研究杂志, 116(3), 743–752。 https://doi.org/10.1172/JCI27125.with

Frock, RL, Chen, SC, Da, D., Frett, E., Lau, C., Brown, C., Pak, DN, Wang, Y., Muchir, A., Worman, HJ, Santana, LF, Ladiges, WC, Rabinovitch, PS, & Kennedy, BK (2012).心肌细胞特异性表达层蛋白 A 可改善 Lmna-/- 小鼠的心脏功能。 公共科学图书馆, 7（8），1-9。 https://doi.org/10.1371/journal.pone.0042918

Sullivan, T. (1999).A 型层蛋白表达的缺失会损害核膜的完整性，从而导致肌营养不良症。 细胞生物学杂志, 147(5), 913–920。 https://doi.org/10.1083/jcb.147.5.913

问题： 来自 Tom Misteli：lonafarnib + tozilizumab 在动物身上的治疗持续了多长时间？
回答： 我们从第 22 周到第 30 周对杂合动物进行了初步实验。我们希望重点关注这个时间范围，以评估之前使用托珠单抗观察到的对体重增加的影响。

问题： 来自 Sgonzalo：Giovanna 和 Sammy 的故事很美！！！你们看到托珠单抗治疗有什么副作用吗？或者在早衰症小鼠中没有改善的任何表型？致 Giovanna Lattanzi 博士：问题：来自 tom misteli：lonafarnib + 托珠单抗在动物身上的治疗持续了多长时间？
回答： 谢谢 Susana。不，我们没有看到托珠单抗的任何副作用。在检查的表型中（脊柱后凸、脂肪组织营养不良、毛发和皮肤缺陷、运动活动、主动脉病变和心肌肥大）均得到了延迟/改善。

评论： 来自 MARIE GERHARD-HERMAN ：在美国也用于治疗风湿病和血管炎
回复： 感谢 Marie 提供有关血管炎治疗的有趣信息。

评论： 来自 pc stefano：托珠单抗在日本也获批用于治疗 Castleman 病，且无免疫抑制作用
回复： 感谢 Stefano 提供这些信息。

问题： 来自 Delphine Larrieu：您是否看到在 HGPS 细胞/HGPS 小鼠模型中，使用早老素治疗后的 DNA 损伤减少？
回答： 我们观察到DNA修复相关基因（BRCA1、Rad51等）在使用progerinin治疗后发生了改变。

问题： Delphine Larrieu 撰文：孕激素如何在 Werner 中发挥作用
据我所知，这种综合征不表达早老素？该分子还有其他靶点吗？
回答： WS 细胞也能像正常老年人一样产生少量的早衰蛋白
细胞。我们在 mRNA 水平上观察到了 WS 细胞中早老蛋白的表达。
我们认为 WRN 蛋白可以起到抑制早衰蛋白的作用。然而，在
在 WS 患者中，由于没有 WRN 蛋白，因此早老蛋白的表达
被认为发生在 20 多岁和 30 多岁之间，与正常年龄的人一样多
人们。

问题： Bob Bishop 表示：早老素结合位点是否由生化定义，或者
结构上？是否有生化检测方法可以发现其他化合物
有这个机制吗？
回答： 我们进行了生物素-亲和素珠下拉试验，并观察到
perogerin 与 progerin 有特异性相互作用，但与 lamin A、lamin
B、p53 或 emerin。
我们还进行了 Elisa 试验，以找到可能
是假定的早老蛋白/层蛋白 A 结合抑制剂。将早老蛋白重组蛋白依次与化学库和层蛋白 A 一起孵育。
然而，progerinin 是化学物质中最有效的化学物质
图书馆。

问题： 来自 John Cooke：Kim 博士，进步很大。Progerinin 是否会降低
SASP 细胞因子的分泌？
回答： 我们观察到 progerinin 可以降低
HGPS 单元。

问题： 来自 Susan Michaelis：progerinin 可以供研究人员使用吗？
回答： 当然，只要你提出要求，我们就可以为你提供。

问题： 来自 Thomas W Glover：我可能错过了，但你认为
导致沃纳综合征有益效果的机制是什么？
回答： WS 患者来源的细胞也会产生少量的早衰蛋白，因为
与来自老年人的正常细胞非常相似。早老素也可以
通过减少早老素的表达对 WS 细胞有效。

回答： 谢谢你的提问：不，不是炎症本身。部分与炎症有关，我们在本项目中研究了巨噬细胞，发现敲除 免疫学 增加巨噬细胞胆固醇流出，包括基础胆固醇和 ApoAI 和 HDL 刺激的胆固醇流出。由于这种影响有时与体内胆固醇逆向转运增加有关，我们想确定 免疫学 抑制会减少动脉粥样硬化的发展。

问题： 来自 vandres：您是否尝试过在不同年龄的人类 HGPS 成纤维细胞中进行 DNA 校正（体外），并测试其表型的正常化，看看它是否会随着细胞老化而降低？
回答： 不，我们没有尝试对来自不同年龄段患者的成纤维细胞进行矫正——仅对两个不同的患者进行了矫正，结果相似。

问题： Delphine Larrieu 表示：效果惊人！您认为杂合子小鼠中早衰蛋白会被完全 KO 吗？
回答： 在单拷贝小鼠中，我不会期望编辑效率与我们目前观察到的有太大差异，因为每个早衰蛋白应该已经有过量的编辑剂。

问题： 来自 Andre Monteiro Da Rocha：您是否认为对低比例的细胞进行重新编程可以修复干细胞功能，但可能会导致成体干细胞衰竭？
回答： 我们没有任何数据可以回答这个问题。

问题： 来自梅：看起来像心肌细胞，染色很漂亮！
来自 Abby Buchwalter：显性负性 Sun1 表达是否会破坏所有 LINC 复合物，包括由 Sun2 介导的复合物？
回答： 是的，有体外证据表明，NE 中的所有 Nesprins 都可以被 DNSUN1 取代

问题： 来自 Suet Nee Chen：AAV9-SunDn 能够产生长期效果的机制是什么？您在什么年龄将 AAV9-Sun1DN 注射到 LMNA 突变小鼠体内？
回答： 我们在诱导 Cre 重组酶删除层蛋白 A 后一天注射了 DNSUN1 AAV。我们有数据表明，AAV 递送的 DNSUN1 在注射一年后仍在心肌细胞中表达。现在我们回到实验室，可以自行制造足够数量的 AAV，我们正在进行剂量/时间/反应实验

问题： 来自 Viceordförande Kommittén forskning 的 Martin Bergö：您认为在 Lmna 敲除实验中缺失核纤层蛋白 A 与核纤层蛋白 C 的相对贡献是什么？
回答： 我对此并不确定，但 Sun1 与 LaminA 相互作用，并且在 HGPS 小鼠中，贡献必须全部来自 LaminA（progerin 由此衍生）

问题： 来自 jcampisi：SUN1 KO 或 hets 的死因是什么？
回答： 好问题，我们仍然不知道，但目前怀疑一些骨骼肌群我们需要对垂死的老鼠进行适当的组织病理分析

问题： 来自 Tom Misteli：Colin：您是否看到过 Lmna/Sun 动物的细胞应激反应途径的变化？
回答： 我们尚未测量这些小鼠的任何应激反应基因/标记

问题：来自 Delphine Larrieu：您是否设想仅针对 HGPS 患者的心脏使用 DNSUN1？
回答： 鉴于血清型和心肌细胞特异性启动子的使用，这是可能的。这些实验目前正在进行中

问题：来自王月霞：为什么KO SUN1 对纯合G609G小鼠的益处较小？
回答： 可能是因为纯合子小鼠表达了更多的早衰蛋白。我们在遗传实验中看到了杂合子与纯合子的反应效应

问题：来自 Roland Foisner：嗨，Colin，讲得不错。上调的 SUN1 在 HGPS 中有什么负面影响。Roland
回答： 可能增加了 MT 网络与 LINC 复合体的关联。培养细胞中 Sun/Nesprin 表达增加会影响核定位和细胞迁移

很荣幸能见到 Basso 和 Peraut 一家。感谢您分享您的旅程。您真的非常鼓舞人心！

感谢萨米和亚历山德拉的家人参加研讨会并分享你们与早衰症抗争的励志历程！

艾格峰取得了惊人的进展，即将获得批准。

我们可以将本次会议延长至本周末并继续讨论吗？（谢谢大家！） 

这次研讨会太棒了。我祝贺 PRF 致力于开展这项伟大的活动。毫无疑问，这次研讨会让我对我的未来充满了许多知识。真是太棒了。我们将共同找到治愈方法！

PRF 会议上令人兴奋的科学总是令人印象深刻。非常感谢组织者即使在这种虚拟形式下也保留了社区研讨会的体验！

你们太棒了！感谢你们给了我这个绝佳的机会，回想多年前，现在感觉就像生活在未来！很高兴能成为其中的一员

我怀念 Collin 博士的吉他。干得好！

非常感谢您组织这次活动，这真是我本周最精彩的时刻！

感谢大家，明年在剑桥见！

 感谢大家加入我们！